体液性免疫は、B リンパ球の数、クラス M、G、A の血清免疫グロブリンの濃度、およびさまざまな抗原に対する血清抗体価を測定することによって評価されます。 これには、大腸菌やブドウ球菌に対する異好性抗体の検出、抗原抗体免疫複合体の検査も含まれます。

補完的なロゼット形成の方法。この方法は、Ｂリンパ球の膜上に免疫グロブリンのＦｃフラグメントおよび第３補体成分に対する受容体があるという事実を考慮に入れている。

ヒト赤血球に免疫グロブリンまたは免疫グロブリンと補体の複合体を負荷することにより、赤血球とBリンパ球の結合が達成されます。 T リンパ球数と同様に、ロゼット形成リンパ球には少なくとも 3 つの赤血球が付着していると見なされます。

Bリンパ球の膜には、マウス赤血球の受容体もあります。 この点に関して、多くの著者は、マウス赤血球による自発的なロゼット形成法を使用して B リンパ球の数を決定することを提案しています。 Bリンパ球を検出するためのより正確な方法は、免疫グロブリンの1つまたは別のクラスに対する蛍光抗免疫グロブリン血清によるリンパ球の処理に基づいています。

この場合、B リンパ球は、蛍光顕微鏡またはモノクローナル抗体を使用した自動レーザー セル ソーターを使用してカウントされます。 末梢血中 健康な人 B リンパ球は、リンパ球の総数の 10 ～ 30%、または血液 1 mm 3 あたり 100 ～ 900 個の細胞を構成します。

血清中の免疫グロブリン濃度の測定。 Mancini によるゲルでの放射状免疫拡散法は、最も広く普及しています。 この方法の原理は、研究対象の血清のサンプルを、1 つまたは別のクラスの免疫グロブリンに対する抗体を含む寒天のウェルに入れることです。 血清免疫グロブリンは寒天に拡散し、抗体と相互作用して沈殿リングを形成します。 血清中の免疫グロブリンの含有量は、沈殿リングの直径の大きさによって判断されます。

レーザーネフロメトリーを使用して血清中の免疫グロブリンの濃度を決定する方法もあります。 これは、ヒト免疫グロブリンに対する単一特異性ウサギ抗血清の使用を含み、高い精度と実行速度を特徴としています。

健康な人の血清中の免疫グロブリンの次の含有量は正常と見なされます。 M - 0.5 - 2 g / l、G - 7 - 20 g / l、A - 0.7 - 5 g / l。

イソヘマグルチニン (アルファ、ベータ) および異好性抗体の測定。イソヘマグルチニンのレベルは、AB (IV) 血液型のヒト赤血球を使用して決定され、死んだ培養物は異好性抗体の力価を決定するための抗原として使用されます。 大腸菌、ブドウ球菌、連鎖球菌および他の一般的な微生物体。

凝集反応は、2 の倍数のさまざまな希釈でヒト血清を使用して実行されます。この方法は半定量的であり、凝集が見られる最後の血清希釈を考慮することができます。

能動免疫後の抗体産生の研究。この方法はめったに使用されません。 クリニックでのみ入手可能で、免疫応答の有用性の問題を解決するために使用されます。

検査された患者は、さまざまな不活化ワクチンで積極的に免疫されています。ジフテリア、破傷風、肺炎球菌、髄膜炎菌など。血清中の抗体力価の値によって、免疫応答の有用性が決まります。 これらの研究は、腎臓、肝臓、アレルギー状態、およびがん患者の疾患には禁忌です。

Bリンパ球特異的マイトジェンによって刺激されるRBTL。 Mitogenlacosa は B リンパ球に特異的であり、反応原理は T リンパ球の場合と同様です。

生検 リンパ節、骨髄、粘膜領域 小腸. この手順は、プラズマ細胞の組織学的検出、リンパ濾胞の存在と構造を目的として実行されます。

体液性免疫の欠陥は、通常、Bリンパ球の数の減少と、免疫グロブリンおよび抗体価の濃度の減少の両方によって決定されます。 さらに、クラスの1つの免疫グロブリンの濃度の増加と他のクラスの免疫グロブリンの含有量の減少を特徴とする異常ガンマグロブリン血症が発症する機能障害が観察されます。

1つまたは2つのクラスの免疫グロブリンの濃度の減少または増加も、他のクラスの免疫グロブリンの正常な含有量の背景に対して発生します。 このような障害の矯正の成功は、臨床診断の正確さと、免疫向性薬を使用した基礎疾患の合理的な治療にかかっています。

「がん患者の免疫の補正」
前立腺」、V.A.サビノフ

免疫グロブリンのレベルを決定することは、体液性免疫を評価するための重要で信頼できる方法です。 これは、抗体生合成の欠如に関連するあらゆる形態の免疫不全を診断するための主要な方法と考えることができます。

B細胞の代謝における可塑的なリンク。 免疫グロブリンの濃度の変化は、液性関連免疫病理学の確認として機能します。 患者の血清中のこの濃度の低下は、免疫グロブリンの合成における遺伝的欠陥から、体によるタンパク質の損失に関連する一時的な状態（液性エフェクター免疫不全）まで、さまざまな病状を示している可能性があります。 標準値に対する濃度の増加は、アレルギー性の自己免疫プロセス (抗体依存性細胞毒性) の存在を示します。 感染症それらの発達の特定の段階で（病気の急性期および/または慢性感染症の悪化中のIgMの増加、解決の段階および/または慢性感染症の形成におけるIgG）。 さらに、この方法は、免疫グロブリン含有薬による補充療法を含む治療の有効性の基準です。

正常なレベルでは免疫グロブリンのサブクラスが欠損している可能性があるため、IgG サブクラスの決定は診断上の価値があります。 そのような人々では、場合によっては、免疫不全状態が観察され、感染症の罹患率の増加に現れます。 したがって、免疫グロブリン G の IgG2 サブクラスは、カプセル化された細菌 (インフルエンザ菌、肺炎球菌) の多糖類に対する抗体を主に含むため、IgG2 および IgA に関連する欠乏は、罹患率の増加につながります。 呼吸器感染症. IgA サブクラスの比率、およびカッパ鎖とラムダ鎖の比率の乱れも、免疫不全状態の原因となる可能性があります。

成人に特徴的な血清免疫グロブリン（IgM、IgGi、IgG3）のレベルに達する 正常値すでに産後初期。 IgG2、IgG4、IgAの濃度は、思春期であっても基準に達しません。 成人の血清中のIgGサブクラスの分布は次のとおりです：IgG1 - 60-65%、IgG2 - 20-25%、IgG3 - 10-20%、IgG4 - 10-20%。

ほとんどの場合、患者は IgG2、IgG4、IgA、および IgE 欠損症と関連しています。 IgG サブクラスのレベルを決定することは、次の場合に不可欠です。 過敏症に 細菌感染症. ほとんどすべての免疫グロブリンの欠乏が確認されています。 最も重大な欠乏は IgG2 であり、これはしばしば IgA の完全な欠如と組み合わされます。

体液性免疫の状態に関する重要な情報は、さまざまな抗原に対する特異的抗体の測定によって提供されます。これは、この特定の感染からの身体の保護の程度は、免疫グロブリンの一般的なレベルには依存せず、特異的抗体の数に依存するためです。その病原体。 現在、細菌、ウイルス、真菌の感染および侵入に対する抗体のレベルを認識するための多数の試験システムがあります。 それらをリストする必要はありません。

IgE の総レベルの測定は、 鑑別診断 IgG4とともにアトピー性疾患。 臍帯血中の高レベルの IgE は、アトピー性疾患のリスクが高いことの指標として役立つ可能性があります。

患者の自己免疫プロセスは、血清中に特定の自己抗体が検出された場合に診断できます。 さもなければ、病気の自己免疫の発生を除外することができ、それはさらなる研究と治療戦術の過程に大きな影響を与えるでしょう. 血清中の未変性および変性 DNA に対する抗体の検出も、固相担体上の ELISA によって行われます。 抗原としての DNA はプラスチックに吸着されており、検査血清に含まれる DNA に対する自己抗体がこの抗原と特異的に相互作用します。 天然および変性 DNA に対する自己抗体の検出は、全身性結合組織疾患、活動性炎症プロセス、 慢性肝炎、感染性心内膜炎および自己免疫プロセスを伴う他の疾患。 さまざまな疾患における DNA に対する自己抗体の存在 臨床症状自己免疫プロセスの証拠として役立つ可能性があります。

ELISA 法を使用すると、心臓、肺、腎臓、肝臓、結腸などの組織の抗原に対する臓器特異的な自己抗体を見つけることができます。 小腸、エラスチンやコラーゲンなどの非臓器特異的抗原に対しても同様です。

免疫グロブリン (IgA、IgM、IgG) の定量的含有量は、体液性免疫応答の主要な指標であり、機能的有用性を評価するために必要です。 免疫系そしてその仕事の病理学的障害の診断。

免疫グロブリンのレベルを測定することは、原発性免疫不全症、単クローン性免疫グロブリン血症、自己免疫疾患などの診断および臨床モニタリングにおいて重要です。 病的状態(X連鎖無ガンマグロブリン血症、高IgM、選択的IgA欠損症、IgGサブクラス欠損症、一過性新生児低ガンマグロブリン血症など)。 で 原発性免疫不全免疫グロブリンの測定は、診断上決定的に重要です。

濃度の低下は、免疫グロブリンの合成における遺伝的欠陥から、体によるタンパク質の損失に関連する一時的な状態まで、さまざまな病状を示している可能性があります。 免疫グロブリンの合成が減少する理由は次のとおりです。 熱傷、悪性リンパ腫、形質細胞腫、癌腫、ホジキン病、腎臓病、一次および二次免疫不全。

抗原との最初の接触時に、IgM が最初に合成され、次に IgG が合成されます。 繰り返されると、IgGはより速く、より大量に合成されます。 IgA は、ウイルスや細菌の毒素を中和します。 濃度の増加は、感染症の特徴であるアレルギー性の自己免疫プロセスの存在を示します。 さまざまな病的状況で、さまざまなクラスの Ig の増加が認められます。 IgMの濃度は、急性期および慢性感染症の悪化中に増加します.IgG-慢性感染症の解決または形成の段階で、IgA-一部のウイルス感染症では.

研究方法： >

補体系

補体系は、血液中に常に存在するタンパク質の複合体です。 これは、細胞を溶解できるタンパク質分解酵素のカスケード システムであり、異物の作用から体液を保護することを目的としており、体の免疫応答の実行に関与しています。 それは自然免疫と獲得免疫の両方の重要な要素です。

抗原抗体反応によって活性化され、抗体を介した免疫溶血および溶菌に必要であり、食作用、オプソニン化、走化性および免疫溶血において重要な役割を果たし、特定の抗体と抗原との相互作用の効果を高めるために必要です。 .

血清中の補体因子が減少する理由の 1 つは、補体因子に対する自己抗体である可能性があります。 C3およびC4補体成分の減少には、 臨床写真再発性皮膚出血性血管炎および関節痛。

血液中の補体成分のレベルは大きく異なります。 補体成分またはそれらの阻害剤の遺伝的欠乏は、自己免疫疾患、繰り返される細菌感染、および慢性炎症状態につながる可能性があります.

補体のC3成分は、システムの中心的な成分であり、炎症の急性期のタンパク質です。 これは、感染に対する防御システムの重要な部分です。 肝臓、マクロファージ、線維芽細胞、リンパ組織、皮膚で産生されます。 C3の活性化により、マスト細胞と血小板からヒスタミンが放出され、白血球の走化性と抗原との抗体の結合、食作用が維持され、血管壁の透過性が増加し、平滑筋が収縮します。 C3 の活性化は、自己免疫疾患の発症に重要な役割を果たします。

補体の C4 成分は、肺で合成される糖タンパク質です。 骨組織. C4 は食作用をサポートし、血管壁の透過性を高め、ウイルスの中和に関与しています。 それは、補体系の活性化の古典的な経路にのみ関与しています。 体内の補体含有量の増減は、多くの疾患で観察されます。

研究の適応

• 先天性補体欠乏症、自己免疫疾患、急性および慢性の細菌およびウイルス感染症（特に再発性）、腫瘍性疾患の疑い;
• 全身性自己免疫疾患患者の動的モニタリング。

サンプルの収集と保存条件:血清。 4 ～ 8 °C で 24 時間以内に保管してください。 1 つのサンプルの凍結が許可されます。

研究方法： ELISA、免疫比濁法、免疫比濁法。

C3濃度の低下- 先天性補体欠損症、さまざまな炎症性および感染性、自己免疫疾患で観察され、 長期断食、細胞増殖抑制剤、電離放射線の治療において。

C4の濃度を上げる自己免疫疾患で観察される急性期反応の特徴、特定の薬の任命。

C4濃度の低下- 補体系の先天性欠損症 (新生児の C4 欠損症)、いくつかの自己免疫疾患、全身性血管炎、シェーグレン症候群、腎臓移植で観察されます。

循環免疫複合体

血中のCECは、体内のさまざまな炎症プロセスの発生とその経過の活動の指標です。 CEC の増加は、急性期および 慢性感染症、自己免疫疾患、 ウイルス性肝炎. CECは、特に血管炎などの合併症がある場合に、SLEおよびRAの多くの人に存在します. 病気の活動性と血液中のCECレベルの間には正の相関があります。 CEC の形成は、細網内皮系を介した内因性または外因性の抗原の迅速な除去につながる生理学的防御メカニズムです。 ただし、CEC には補体を結合して活性化する能力があり、これが組織の損傷につながります。 血流を小さな血管に残すと、組織、腎臓の糸球体、肺、皮膚、関節、および血管壁に沈着する可能性があります. 臨床的には、これはしばしば糸球体腎炎、関節炎、および好中球減少によって現れます。 免疫複合体に対する病理学的反応は、除去速度を超えるそれらの形成速度の過剰、1つまたは複数の補体成分の欠乏、または食細胞系の機能的欠陥による可能性があります。 血清および/または他の体液中の高レベルのCECは、病状の発症を引き起こす可能性のある多くの炎症性および悪性疾患で観察されます。 血清中の CEC の測定は、特に自己免疫疾患において、疾患活動性を評価するための重要なマーカーです。 病気の経過中または治療中のCECの濃度の低下は、絶滅を示しています 炎症過程そして治療の有効性。

研究手法：ヒト血清中のCICを決定するために、免疫比濁法および免疫ターボディメトリーの方法が使用されます。

サンプルの収集と保存条件:血清。 サンプルは 4 ～ 8 °C で 24 時間以上安定です。 1 つのサンプルの凍結が許可されます。

研究の適応:自己免疫疾患、アレルギー疾患、感染症の活動の評価とモニタリング。

値の増加

2. 体液性および細胞性免疫の状態を評価する方法。 体の免疫状態の評価。

臨床免疫学は、患者の診断と治療を扱う臨床および検査分野です。 さまざまな病気免疫学的メカニズムに基づく病態、ならびに免疫製剤が主導的な役割を果たす治療および予防における状態。

免疫状態は、個人の免疫系の構造的および機能的状態であり、臨床および実験室の免疫学的パラメーターの複合体によって決定されます。

したがって、免疫状態は、免疫系の解剖学的および機能的状態、つまり特定の抗原に特定の時点で応答する能力を特徴付けます。

以下の要因が免疫状態に影響を与えます。

気候地理的; 社交; 環境（物理的、化学的、生物学的）; 「医療」（薬物、外科的介入、ストレスなどの影響）。

気候的および地理的要因の中で、免疫状態は温度、湿度、日射量、日照時間などの影響を受けます。たとえば、食作用反応および皮膚アレルギー検査は、北部地域の居住者では南部の人々よりも顕著ではありません。 白人のエプスタイン・バーウイルスは、感染症 - 単核症、黒人 - 腫瘍病理学（バーキットリンパ腫）、および黄色人 - まったく異なる腫瘍病理学（鼻咽頭癌）を引き起こし、男性にのみ発生します。 アフリカ人はヨーロッパ人よりもジフテリアにかかりにくいです。

免疫状態に影響を与える社会的要因には、栄養、生活条件、職業上の危険などが含まれます。体は免疫担当細胞の構築とその機能のために、免疫グロブリンの合成に必要な物質を食物とともに受け取るため、バランスのとれた合理的な食事が重要です。 必須アミノ酸とビタミン、特に A と C が食事に含まれていることが特に重要です。

生活条件は、生物の免疫状態に大きな影響を与えます。 劣悪な住宅条件での生活は、全体的な生理学的反応性、免疫反応性の低下につながり、感染症の罹患率のレベルの上昇を伴うことがよくあります。

人は人生の大部分を仕事に費やすため、職業上の危険は免疫状態に大きな影響を与えます。 体に悪影響を及ぼし、免疫反応性を低下させる可能性のある生産要因には、電離放射線、化学物質、微生物とその代謝産物、温度、騒音、振動などがあります。現在、放射線源はさまざまな産業 (エネルギー、鉱業、化学産業) で非常に広まっています。 、航空宇宙など）。

塩分は免疫状態に悪影響を及ぼす ヘビーメタル、芳香族、アルキル化化合物、および実際に広く使用されている洗剤、消毒剤、殺虫剤、殺虫剤を含むその他の化学物質。 このような職業上の危険は、化学、石油化学、冶金産業などの労働者に影響を与えます。

微生物とその代謝産物（ほとんどの場合、タンパク質とその複合体）は、抗生物質、ワクチン、酵素、ホルモン、飼料タンパク質などの生産に関連するバイオテクノロジー産業の労働者の体の免疫状態に悪影響を及ぼします.

低温または高温、騒音、振動、低照度などの要因は、免疫反応性を低下させ、神経系および神経系を通じて免疫系に間接的な影響を与える可能性があります。 内分泌系免疫系と密接に関係しています。

環境要因は、主に放射性物質による環境汚染（原子炉からの使用済み燃料、事故時の原子炉からの放射性核種の漏出）、農業における農薬の広範な使用、化学企業や車両からの排出物など、人の免疫状態に世界的な影響を及ぼします。 、バイオテクノロジー産業。

免疫状態は、さまざまな診断および治療の医学的操作、薬物療法、およびストレスの影響を受けます。 X線撮影、放射性同位体スキャンの不当で頻繁な使用は、免疫システムに影響を与える可能性があります。 外傷や手術後に免疫反応が変化します。 多くの 薬、抗生物質を含む、特に長期間使用すると、免疫抑制の副作用が生じる可能性があります。 ストレスは、主に中枢神経系を介して作用する免疫のTシステムの働きに障害を引き起こします。

通常の免疫学的パラメーターの変動性にもかかわらず、免疫状態は、非特異的耐性因子、体液性 (B システム) および細胞性 (T システム) 免疫の状態の評価を含む一連の実験室試験を設定することによって決定できます。 .

免疫状態の評価は、臓器および組織の移植、自己免疫疾患、アレルギーの診療所で行われ、さまざまな感染症および身体疾患における免疫不全を検出し、免疫系の障害に関連する疾患の治療の有効性を監視します。 検査室の能力にもよりますが、免疫状態の評価は、ほとんどの場合、次の一連の指標の決定に基づいています。

1) 一般的な臨床検査;

2) 自然抵抗因子の状態。

3) 体液性免疫;

4) 細胞性免疫。

5) 追加のテスト。

一般的な臨床検査では、患者の苦情、既往歴、臨床症状、一般的な血液検査の結果（リンパ球の絶対数を含む）、および生化学的データが考慮されます。

体液性免疫は、血清中のクラス G、M、A、D、E の免疫グロブリンのレベル、特異的抗体の数、免疫グロブリンの異化作用、即時性過敏症、末梢血中の B リンパ球の指標、芽球形質転換によって決定されます。 B細胞マイトジェンおよび他の試験の影響下でのBリンパ球の。

細胞性免疫の状態は、T リンパ球の数、および末梢血中の T リンパ球の亜集団、T 細胞マイトジェンの影響下での T リンパ球の芽球形質転換、胸腺ホルモンの測定、レベルによって評価されます。分泌されたサイトカインの、およびステージング 皮膚テストアレルゲン、ジニトロクロロベンゼンによる接触感作。 アレルギー皮膚検査では、ツベルクリンを用いたマントゥー検査など、通常は感作が必要な抗原を使用します。 一次免疫応答を誘発する体の能力は、ジニトロクロロベンゼンとの接触感作によって与えられます。

免疫状態を評価するための追加のテストとして、血清の殺菌性™の決定、補体のC3、C4成分の滴定、血清中のC反応性タンパク質の含有量の決定、リウマチの決定などのテストを使用できます要因および他の自己抗体。

したがって、免疫状態の評価は、免疫系の体液性部分と細胞性部分の両方の状態、および非特異的耐性因子の評価を可能にする多数の実験室試験に基づいて行われます。 すべてのテストは、第 1 レベルと第 2 レベルのテストの 2 つのグループに分けられます。 レベル 1 の検査は、プライマリ ヘルスケアの臨床免疫検査室で実施でき、明らかな免疫病理を有する個人の初期識別に使用されます。 より正確な診断のために、第2レベルのテストが使用されます。

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序章

細胞性免疫（英語） 細胞性免疫) は、抗体も補体系も関与しないタイプの免疫応答です。 細胞性免疫の過程では、マクロファージ、ナチュラル キラー、抗原特異的な細胞傷害性 T リンパ球が活性化され、抗原に応答してサイトカインが放出されます。

免疫系は歴史的に、体液性免疫系と細胞性免疫系の 2 つの部分に分けられます。 体液性免疫の場合、保護機能は血漿中の分子によって実行されますが、そうではありません。 細胞要素. 一方、細胞性免疫の場合、防御機能は免疫系の細胞と正確に関連しています。 CD4 分化クラスターまたは T ヘルパーのリンパ球は、さまざまな病原体に対する保護を提供します。

細胞性免疫系は、次の方法で保護機能を実行します。

体細胞のアポトーシスを引き起こす可能性がある抗原特異的細胞傷害性 T リンパ球を活性化することにより、表面上の外来抗原のエピトープを示します。たとえば、細菌を含むウイルスに感染した細胞や、腫瘍抗原を示す腫瘍細胞です。

細胞内病原体を破壊するマクロファージとナチュラルキラーを活性化することにより;

· サイトカインの分泌を刺激することにより、適応免疫応答および自然免疫応答に関与する免疫系の他の細胞に影響を与えます。

細胞性免疫は、主に食細胞内で生存する微生物と、他の細胞に感染する微生物に対して行われます。 細胞性免疫系は、ウイルス感染細胞に対して特に効果的であり、真菌、原生動物、細胞内細菌、および腫瘍細胞に対する防御に関与しています。 また、細胞性免疫系は、組織拒絶において重要な役割を果たします。

細胞性免疫を評価する方法には 3 種類ありますが、これについては以下で説明します。

Tリンパ球、Tヘルパー、Tサプレッサー、キラーリンパ球の数の測定

これは、免疫蛍光法とこれらの細胞の表面受容体に対するモノクローナル抗体を使用して実行されます：CD3 +すべてのTリンパ球、CD 4 +ヘルパー、CD 8 +サプレッサー、CO 16 +キラー。 最近まで、ロゼット テストは、T リンパ球とそのサブクラス (ヘルパー、サプレッサー、キラー) を定量化するために使用されていました。 ラム赤血球とロゼットを形成するリンパ球の能力。 しかし、この検査は現在その重要性を失いつつあり、リンパ球の表面受容体に対するモノクローナル抗体を使用する、より単純でより特異的な免疫蛍光法に取って代わられています。 ここでロゼット テストについて言及しているのは、以下で説明する結果の一部がロゼット テストの助けを借りて得られたという事実によるものです。

免疫蛍光分析 (もし - 蛍光抗体法, 免疫蛍光） （英語） 免疫蛍光） - 細胞懸濁液のサンプル（細胞培養、細菌、マイコプラズマ、リケッチア、ウイルス）、血液サンプル、骨髄、肺胞洗浄液、薄組織切片中の表面および細胞内抗原の定性的および定量的測定のための一連の免疫学的方法。 この方法により、特定の病原体または疾患に特徴的な特定の抗原決定基の存在について生物学的サンプルを詳細に分析し、表面および細胞内の両方のタンパク質および受容体を定量化することが可能になります。 検査と評価は、蛍光顕微鏡を使用して手動で行うことも、フローサイトメーターを使用して自動化することもできます ( フローサイトメーター) またはマイクロチップサイトメーター ( チップサイトメーター）。 共焦点顕微鏡やロボット蛍光顕微鏡（フローサイトメーターと組み合わせたものを含む）とソフトウェア画像処理システムを組み合わせて使用​​することが可能です。 現在利用可能な自動化技術により、非常に有益な顕微鏡法とサイトメトリーの形式で一連の異なる蛍光マーカーを使用して、1 つのサンプル内の約 50 の異なる抗原を分析することができます (これらの方法は、 ハイコンテントイメージング, ハイコンテントサイトメトリー, ハイコンテントスクリーニング）および最新のフローサイトメトリーまたは共焦点顕微鏡を使用した抗原の最大セットの約半分。 主な実用的なアプリケーションは、腫瘍学、微生物学、細胞生物学、遺伝学、薬理学などです。

メソッドの本質と分類 . この方法の本質は、蛍光マーカーを用いた特異的抗体による抗原の可視化にあります。 グロブリンと有機蛍光色素との結合方法は、1942 年に A. Koons (英語) ロシア語 (たとえば、Sybr Green II)、脂質およびタンパク質によって開発されました。

基本的なMFAメソッドには、 真っ直ぐ A. Koons と Melvin Kaplan によって開発された方法 [2] および 間接的、元のバージョンで A. Koons と Wheeler によって開発されました 間接的もし 補完あり.

直接法 ( pMFA）蛍光色素で直接標識された抗体の溶液が、試験調製物または細胞懸濁液に適用されます。 抗原抗体複合体の形成は、さまざまな強度と透明度のグローの形をした蛍光シグナルによって検出されます。

で 間接法 (nMFA) 目的の抗原に対する抗体 (いわゆる「一次」抗体) が調製物に適用され、次に「一次」抗体に対する種特異的な「二次」抗体が適用され、非特異的な反応が回避されます。 この場合、二次抗体のみが蛍光色素とコンジュゲートされます。 たとえば、研究でマウス抗体 - マウス IgG が「最初の」抗体として使用される場合、蛍光色素と結合した抗種抗マウス IgG が「2 番目の」抗体として使用されます。 抗原抗体複合体は、「二次」抗体に結合した後にのみ蛍光染色を生成します。

間接法では、蛍光色素を含む抗グロブリン種の血清のみが必要ですが、多数のテスト コントロールが必要です。 直接法による設定では、1 つのコントロールのみが作成されますが、以前のバージョンの方法では多くの単一特異性血清が必要でした。 長い間直接タイプの MFA の欠点は、抗原組成が類似している物体間の交差反応の可能性が存在するために感度が制限されることと、調製物のさまざまな要素への蛍光グロブリンの吸着による非特異的蛍光でした。 現在、研究対象の抗原に対する免疫グロブリンを含む市販の標準コンジュゲートが使用されています。 バイオエンジニアリングされた免疫グロブリンの使用と 高度抗体の精製により、非特異的な反応を実質的に無効にすることが可能になり、この方法のさらなる技術開発が可能になりました。

現在、直接法は非特異的反応を回避するため、自動化された方法では免疫蛍光の直接法が主に使用されています。

手動の顕微鏡評価の結果は、いわゆる「クロス」（1 + から 4 ++++）で表されます。これは、研究者の目による反応の重症度の主観的な段階です。 自動化された方法では、光電子増倍管または高感度蛍光カメラが検出器として使用されます。これにより、信号を高精度で記録でき、広範囲のスケールで相対蛍光レベル (相対蛍光比) の値が得られます。 絶対値は、サンプル中の一定量が既知のコントロールまたは抗原を使用して計算されます。 自動化された方法を使用する場合、データ処理は、画像処理およびサイトメトリー データの分析用の専用プログラムによって実行されます。

手法の意義と展望 . メソッドは重要です 早期診断と治療 腫瘍性疾患(免疫組織化学、腫瘍血液学)、感染症の診断 (例えば、HIV の CD4+ 細胞の測定) および 遺伝性症候群. 自動化された方法が集中的に開発されており、その中には非常に有益な顕微鏡検査の分野があります ( ハイコンテントイメージング) と非常に有益なサイトメトリー (ハイコンテントサイトメトリー) 90年代から並行して開発されてきたサイトメトリー-顕微鏡法（サイトメーター-顕微鏡）の組み合わせ方法、および個々の抗体がナノ粒子で標識されるプラズモンホログラフィーを使用したマイクロチップサイトメトリーの方法。

モノクローナル抗体法。モノクローナル抗体 - 同じ細胞クローンに属する、つまり同じ前駆細胞の子孫である免疫細胞によって産生される抗体。 モノクローナル抗体は抗原を認識して結合し、病原体に対する保護を提供する特定のエピトープを認識します。

モノクローナル抗体は、正常細胞やがん細胞の表面に存在する受容体やその他のタンパク質など、細胞の活動に影響を与えるさまざまなタンパク質に結合します。 モノクローナル抗体の特異性により、結合することができます がん細胞また、強力な放射性物質などの細胞毒性物質と相互作用して、健康な細胞に損傷を与えることなく癌細胞を破壊します。

無期限に複製できるがん細胞は、 特異抗体、常に抗体を産生するハイブリドーマの形成につながります。 これらの抗体はモノクローナルと呼ばれ、1 種類の細胞に由来します。 ハイブリッド細胞から。 従来の方法で得られる抗体は細胞から得られる さまざまな種類ポリクローナルと呼ばれます。

モノクローナル抗体は、特定の抗原に対して人工的に産生され、標的抗原に結合します。 単一細胞からの抗原の産生に基づくモノクローナル抗体の実験室での産生により、互いに同一のモノクローナル抗体を得ることが可能になります。

骨髄腫細胞培養物を哺乳類の脾臓細胞抗体と融合させると、モノクローナル抗体を大量に産生するハイブリッド細胞/ハイブリドーマが形成されます。 細胞融合の結果、2 種類の細胞が形成されます。1 つは常に増殖することができ、もう 1 つは純粋な抗体を大量に産生することができます。 ハイブリッド細胞は、従来の技術によって生成されたポリクローナル抗体よりも純粋な優れた抗体を 1 つだけ生成します。 モノクローナル抗体はもっと 効果的な方法、 どうやって 伝統的な方法これらの技術は、異物だけでなく、体自身の細胞にも影響を与えるため、強力な原因となります。 副作用. モノクローナル抗体は、外来抗体/標的細胞とのみ相互作用し、副作用がないか最小限に抑えられます。

面前 多数血液中の特異的なモノクローナル抗体は、体内に異常なタンパク質が存在することを示しています。 通常、このタンパク質は臨床検査中に検出され、タンパク質電気泳動などのスクリーニング血液検査を使用して識別されます。 モノクローナル抗体の異常産生の原因は、骨髄中の形質細胞集団です。

抗ウイルス（9製品）：ANT-143（抗デング2型）、ANT-150（B型肝炎ウイルス）、ANT-156（C型肝炎ウイルスNS3）、ANT-158（D型肝炎ウイルス）、ANT-152（HIV -1 p24)、ANT-159(HIV-1 gp41)、ANT-151 (HIV-1 gp120)、ANT-153 (HIV-2 gp39)、ANT-178 (SARS ヌクレオキャプシドタンパク質)、ANT-179 (SARS スパイク）。

抗マウスリンパ球（9製品）：ANT-175（CD3）、ANT-165（CD4）、ANT-136（CD11b-FITC）、ANT-135（CD11a）、ANT-133、ANT-142（CD90 Thy- 1)、ANT-140 (CD90 Thy-1.1)、ANT-141 (CD90 Thy-1.2)、ANT-139 (B220)

抗マウスサイトカイン（8製品）：ANT-116（CTLA-4）、ANT-105（インターロイキン-2）、ANT-103（インターロイキン-2受容体）、ANT-108（インターロイキン-4）、ANT-113（インターロイキン-10)、ANT-114 (インターロイキン-12p40)、ANT-209 (インターロイキン-12p75)、ANT-166 (IFN-ガンマ)。

抗ヒトリンパ球 (12 製品): ANT-206 (CD1A)、ANT-207 (CD2)、ANT-144 (CD3)、ANT-137 (CD3-FITC)、ANT-138 (CD3-ビオチン化)、ANT- 145 ( CD4)、ANT-132(CD4-FITC)、ANT-167(CD4-ビオチン化)、ANT-171 (CD5)、ANT-148 (CD8)、ANT-131 (CD8-FITC)、ANT-134 ( CD8-ビオチン化)。

抗ヒトケモカイン（9製品）：ANT-126（エオタキシン-1）、ANT-127（エオタキシン-2）、ANT-119（単球走化性および活性化因子）、ANT-120（単球マクロファージ化学毒性因子-3）、 ANT-118（マクロファージ炎症性タンパク質-1a）、ANT-121（マクロファージ炎症性タンパク質-3）、ANT-212（マクロファージ炎症性タンパク質-3）、ANT-212（b）（マクロファージ炎症性タンパク質-3ベータ）、ANT- 170（好中球活性化因子）。

抗ヒトサイトカイン（28製品）：ANT-128（脳由来神経栄養因子）、ANT-183（骨形態形成タンパク質-2）、ANT-169（上皮成長因子）、ANT-187（エリスロポエチン）、ANT-196 (エリスロポエチン クローン NYRhEPO)、ANT-204 (抗 FAS 抗体)、ANT-205 (FAS 活性化抗体)、ANT-197 (成長ホルモン)、ANT-129 (顆粒球マクロファージ CFU)、ANT-184 (顆粒球 CFU) , ANT-122 (インターフェロン-アルファ中和剤), ANT-208, ANT-185 (インターフェロン-ベータ), ANT-123 (インターフェロン-ガンマ), ANT-102 (インターロイキン-2), ANT-104 (インターロイキン-2受容体) ）、ANT-106（インターロイキン-3）、ANT-107（インターロイキン-4）、ANT-109（インターロイキン-6）、ANT-110（インターロイキン-7）、ANT-111（インターロイキン-8）、ANT-112 ( インターロイキン-10)、ANT-115 (インターロイキン-15)、ANT-172 (レプチン)、ANT-117 (ニューロトロフィン-4)、ANT-124 (腫瘍壊死因子-アルファ)、ANT-168 (トランスフォーミング増殖因子-ベータ )、ANT-125 (EPR 成長因子)。

その他の抗体: (25 製品): ANT-191 (CD20)、ANT-130 (クラミジア LPS)、ANT-211 (c-Myc)、ANT-146 (FLAG)、ANT-186 (淋菌)、ANT-176 (H-2K)、ANT-101 (HA タグ タンパク質)、ANT-194 (HBV Ck 表面抗原)、ANT-147 (hCG ベータ コア)、ANT-149 (鶏卵リゾチーム)、ANT-154 (ヒト ヘパラナーゼ-1 3/17)、ANT-202 (Ig カッパ軽鎖)、ANT-203 (Ig ラムダ軽鎖)、ANT-193 (ヒト ヘパラナーゼ-1 130)、ANT-201 (IgA 1&2)、ANT-174 ( IgA Sec の成分)、ANT-173 (IgG-Fc)、ANT-100 (インスリン)、ANT-177 (マルトース結合タンパク質)、ANT-199 (ミエリンオリゴ核球糖タンパク質)、ANT-198 (黄色ブドウ球菌、メチシリン耐性) )、ANT-192 (p53 scFv)、ANT-200 (ミエリンリン脂質タンパク質)、ANT-195 (抗破傷風トキソイド scFv)、ANT-164 (グルタチオン-S-トランスフェラーゼ)。

白血球検査。白血球検査- 変化が身体の特異的反応性と免疫系の機能を評価するための指標となる一連の診断テスト さまざまなプロパティ白血球。 白血球には、ロゼット試験、リンパ球の芽球形質転換、マクロファージ移動の阻害、白血球のアレルギー性変化、およびリンパ球のグルココルチコイド耐性画分を用いた試験が含まれます。

ロゼット試験白血球（リンパ球、顆粒球、単球）の受容体構造の違いに基づいており、赤血球と相互作用すると、赤血球を自発的に表面に付着させることができます。 この場合、ロゼットに似た形が形成され、その中心には白血球があり、その周りには少なくとも3〜5個の赤血球があります。 このテストにはいくつかのバリエーションがあります。 直接検査では、赤血球自体の抗原がロゼットの形成に関与し、間接検査では、赤血球の表面に人工的に固定された抗原が関与します。 直接検査では、自発的および免疫ロゼットが形成されます。自発的ロゼット - ヒトまたは動物のリンパ球とラム赤血球の間。 免疫 - 白血球のドナーの免疫に使用される赤血球を使用。 直接検査は、T リンパ球の数を決定するために使用され (これらの細胞はヒツジ赤血球の受容体を運ぶため)、免疫状態を評価するために広く使用され、場合によっては B 細胞を分離するためにも使用されます。 ロゼットは、B 細胞で形成されるか、細胞 (顆粒球、単球) に固定されている免疫グロブリンによって形成されます。 ロゼット形成現象は赤血球だけでなく、他の細胞や人工顆粒でも起こります。

この方法の本質は、被験者の白血球（リンパ球）の懸濁液を分離し、それらをラム赤血球（抗原で処理または処理していない）の懸濁液とインキュベートし、ロゼット形成細胞の数を数えることからなる。

リンパ球の芽球形質転換- 小さな成熟リンパ球から芽球などの低分化細胞への形質転換。 リンパ球の自発的および誘発性の芽球形質転換があります。 後者は、非特異的なマイトジェンまたは特異的なアレルゲン（抗原）の影響下で発生します。 血液白血球の懸濁液にアレルゲン溶液を加え、混合物を5〜7日間培養した後、染色塗抹標本中のリンパ芽球の割合を顕微鏡で測定します。 リンパ球の芽球形質転換をより正確に評価するために、細胞 DNA に含まれる 3 H-チミジンを細胞懸濁液に添加します。 抗原の存在下と非存在下で培養した細胞サンプルの放射能の違いから、アレルゲン（抗原）の影響下にあるリンパ球の特異的な芽球形質転換の程度を判断します。

マクロファージ遊走の阻害特定の抗原の影響下で発生します。 テストにはいくつかの変更がありますが、最も一般的なのは毛細血管です。 細胞で満たされた毛細血管の一部を栄養培地の入ったウェルに入れ、そこに試験抗原を加えます。 24 細胞培養後 時間 37°で、キャピラリーから移動した細胞のパラメーターの1つが測定されます（直径、移動面積など）。 コントロール (抗原なし) に対する実験パラメーターの比率は、移動指数です。 実験指標と対照指標が 20% 以上異なる場合、反応は陽性と見なされます。 細胞を含むアガロース ドロップからの細胞遊走と、アガロースからの細胞遊走を評価する方法について説明します。 血中白血球はクリニックで最も頻繁にテスト細胞として使用され、マクロファージや時にはリンパ球が実験的に使用されます。 この抗原に感作されたリンパ球から放出されるメディエーター（被験細胞の懸濁液中には常に存在する）によって細胞の遊走が阻害される：マクロファージ遊走阻害因子（MIF）、白血球遊走阻害因子（LIF）など。マクロファージおよび白血球遊走の阻害反応遅延型過敏症の状態を反映しています。 細胞性免疫防御リンパ球

白血球のアレルギー性変化- 特定のアレルゲンの影響下での白血球への損傷。

好中球の損傷を検出するには、Fradkin による PPN テスト (好中球損傷の指標) が使用されます。 アレルギー患者の血液は、アレルゲンと一緒に2年間培養されます。 時間. 次に、ヘマトキシリンによる細胞核の追加の染色でグリコーゲンについて染色される塗抹標本が準備されます。 で 陽性検査血液中を循環する抗体に特異的なアレルゲンに対する好中球のアメーバ様反応が増加します。 アメーバ様反応には、仮足細胞のグリコーゲン飽和が伴います。 蛍光顕微鏡は、血液白血球への特定の損傷を評価するために広く使用されています。 アレルギー性細胞変質の引き金となるメカニズムは、アレルゲンと細胞表面に関連する抗体からなる複合体の形成です。 特定のアレルゲンの影響下での白血球の変化は、即時型アレルギーの指標です。 変化には、細胞の形態学的変化だけでなく、ヒスタミンの放出など、細胞からの生理活性物質の放出も伴います。

糖質コルチコイド耐性リンパ球分画による白血球検査- グルココルチコイドの溶解作用に耐性のある、血液の単位体積あたりのリンパ球の相対値および絶対値。 インビトロ培養下でグルココルチコイドの溶解作用に耐性のあるすべてのリンパ球は、グルココルチコイド耐性と呼ばれます。 使用されるグルココルチコイドに応じて、コルチゾール耐性、コルチコステロン耐性などと呼ばれます. このテストは、抗原刺激の影響下での免疫系の活性化の程度を反映し、疾患の発症中のこの活性化の変化を評価することを可能にするため、予後的価値があります。 感染性、感染性アレルギーおよびアレルギー性疾患では、リンパ球のコルチゾール耐性画分の増加が認められます。 成人では、通常、1 体あたり 60 ～ 64% または 1100 ～ 1250 個のリンパ球です。 mlk血。

Tリンパ球の機能活性の評価

このテストは、T リンパ球が非特異的なマイトジェン (リンパ球の有糸分裂を誘発する能力にちなんで名付けられた物質) による刺激に反応して増殖し、インターロイキン (IL-1 および IL-2) を産生する能力に基づいています。 . 以前は、リンパ球の増殖活性は、現在、放射性標識とシンチレーションカウンターでのカウントを使用して、マイトジェン刺激培養に現れる芽球 (芽球形質転換) と有糸分裂の数によって評価されていたことに注意してください。

増殖活動 Tリンパ球は、マイトジェン（ポリクローナル刺激）または抗原（モノおよびオリゴクローナル刺激）による刺激に応答したDNA合成の強度によって評価されます。 後者の場合、共通の抗原またはアロ抗原が使用されます。 DNA 合成の強度は、3H-チミジンなどの放射性標識ヌクレオシドを含めることによって評価されます。 結果は通常、1 分あたりのパルス数 (ppm) で表され、刺激指数 (刺激されたリンパ球と刺激されていないリンパ球の放射能の比率) として表されます。 マイトジェンは T リンパ球の大部分の増殖を刺激するため、結果は通常 3 日後に評価されます。 抗原は受容体を運ぶ T リンパ球のみの増殖を刺激するため、抗原によって誘導される増殖は 5 ～ 7 日後に評価されます。 T リンパ球の増殖活性を評価するために、皮膚テストのように、広く分布している一連の抗原が使用されます。 HIV 感染者では、共通の抗原に対する T リンパ球の増殖反応は、 初期段階病気。 プログレッション HIV感染症および他の免疫不全症は、同種抗原に対する T リンパ球の応答の低下を伴い、続いてマイトジェンに対する応答も低下します。 マイトジェンに対する応答の欠如は、細胞性免疫の深刻な欠乏を示しています。

さらに、Tリンパ球の研究が行われ、 細胞毒性. 通常、CD8 リンパ球によって媒介される HLA 限定の細胞毒性が評価されます。 標的細胞はそれ自身の細胞であり、その表面に HLA クラス I 抗原に関連する外来抗原を持っています。 ウイルス感染. CD8 リンパ球とともに、HLA クラス II 抗原と組み合わせて抗原を認識する一部の CD4 リンパ球によって、HLA 限定の細胞毒性が実行されます。 リンパ球の両方の亜集団は、アルファ鎖とベータ鎖によって形成される抗原認識受容体を持っています。 ガンマ鎖とデルタ鎖によって形成された抗原認識受容体を持つ CD8 リンパ球は、HLA に限定されない細胞毒性に関与しています。 これらのリンパ球は血液中に少量存在し、NK リンパ球のような標的細胞を破壊します。つまり、事前の免疫なしです。 免疫不全の診断には、細胞毒性の評価が不可欠です。 リンパ球の細胞傷害活性の評価は、次のように行われます。

1) 標的細胞を放射性標識 (51Cr) で処理します。

2) 研究対象のリンパ球が標識された標的細胞に加えられます。

3) 標的細胞の死は、溶液中への放射性標識の放出によって評価されます。 得られた結果は正常値と比較されます。

HLA限定細胞毒性の研究では、研究対象のTリンパ球を標的細胞上に存在する抗原とともにプレインキュベートします。

ナチュラルキラーシステムの評価

このために、標的細胞がほとんどの場合 3 H-ウリジンで標識された K-562 細胞株である細胞毒性試験が使用されます。 試験リンパ球を K-562 培養液に導入し、RNase の存在下でインキュベートした後、溶解した標的細胞から放出された放射性ウリジンのレベルを評価します。

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