文化的（細菌学的）研究方法-栄養培地で培養することにより、微生物（細菌）の純粋な培養物を分離および同定することを目的とした一連の方法。
純粋な培養物は、同じ種の微生物の集まりです。 ほとんどの場合、純粋な培養物は、単離されたコロニー（単一の微生物細胞の子孫）を選択して培養することによって得られます。
メソッドの手順：
1.研究用資料の収集。
2.純粋培養の分離とその同定。
3.結論。
研究用資料集。研究対象の材料の種類は、研究の目的によって異なります（診断-患者から、疫学分析-環境、食品、患者、および（または）細菌キャリアから）。
純粋培養の分離。 3つまたは4つの段階が含まれています：
1.孤立したコロニーを得るために、高密度の栄養培地（できれば鑑別診断または選択的）を入れたカップに材料を播種します（予備顕微鏡検査後）。 ほとんどの場合、機械的分離の方法で製造されます。 場合によっては（たとえば、血液）、材料は液体濃縮培地に事前に播種され、続いて寒天培地を含むプレート上で継代培養されます。 接種前に材料の選択的処理が行われることもあります（分離された微生物の特性を考慮して、たとえば、耐性菌を分離するための酸またはアルカリによる処理）。 37℃の温度で18〜24時間培養。 の栽培時間 他の種類バクテリアは変動する可能性があります。
2（3）：a）寒天プレート上のコロニーの研究（文化的特徴）、最も典型的なものの選択。 b）染色によるこれらのコロニーからの塗抹標本の調製（グラムまたは他の方法による）。 a）蓄積培地上で研究されたコロニーの残りをスクリーニングし、最適な温度でサーモスタット内で成長させます。
3（4）。 蓄積培地で得られた培養物の純度の研究。 これとともに
目的は、塗抹標本、染色（通常はグラムによる）を準備し、顕微鏡で研究することです
形態学的および着色的均質性（異なる視野で）。
4（5）。 純粋な培養の識別。
結論。参照（典型的な）菌株の特性と比較した特徴の全体に従って、材料から分離された微生物のタイプが示されます。
メソッド評価：
利点：比較的高い感度と精度、試験物質中の微生物の数を決定する能力、および抗生物質に対する感受性。 制限：相対的な期間、この方法は高価です。
21.好気性菌と嫌気性菌の栄養培地。 栄養培地の要件、分類。
要件：
メディアは栄養価が高い必要があります
特定のpHが必要です
等張である必要があります。 培地の浸透圧は細胞の浸透圧と同じでなければなりません。
しっとりしていて、あまりにも流動的であってはなりません
特定の酸化還元電位が必要です
無菌でなければなりません
統一する必要があります。 一定量の個々の成分が含まれています。
栄養培地は分けることができます：
A）起源
1）自然-自然食品（肉、牛乳、ジャガイモ）;
2）人工-微生物を成長させるために特別に調製：-天然物からの培地（肉水、肉-ペプトンブロス（MPB）、肉-ペプトン寒天（MPA）、-一定の組成を持たない;-合成栄養培地-厳密に溶液蒸留水中の定義された量の塩、アミノ酸、窒素塩基、ビタミン-一定の組成を持ち、ワクチン、免疫血清、抗生物質の生産で微生物や細胞培養を成長させるために使用されます。
B）予約制：
1）汎用（MPB、MPA）-ほとんどの微生物はそれらの上で成長します。
2）選択的-混合物からの1種類の微生物の増殖を選択的に促進します（たとえば、ブドウ球菌用の卵黄-塩寒天培地）。
3）鑑別診断-あるタイプの微生物を、環境の外観によって他のタイプから区別できるようにします（たとえば、Endo、腸内微生物グループのLevinメディア）。
また、 使用目的純粋な培養物を分離するためのスキームでは、以下の培地を目的によって区別することができます。
1）濃縮-病原体に関連する微生物の増殖を抑制します。
2）孤立したコロニーを取得する。
3）純粋な培養の蓄積;
B）一貫性：
1）液体;
2）半液体（0.5-0.7％の濃度の寒天を添加）。
3）高密度-1％以上。
細菌学的方法病原体（同じ種の細菌を含む集団）の純粋な培養物を分離し、この病原体を特定することが細菌学的研究の主な方法です。
特定の体系的なグループ（種、属）に属することを確立するための細菌学研究室での微生物の特性の研究は、それらの同定と呼ばれます。
一般に、細菌学的研究方法は、18〜24時間続く多段階の細菌学的研究です。
細菌学的方法-それはどのように実行されますか？
細菌学的方法では、嫌気性培養物を嫌気性菌に入れます。 バルーンから空気を取り除き、酸素を含まない混合ガスに置き換えます。
細菌学的方法の基本は、研究の最初の段階で行われる病原体の純粋な培養物の分離です。 病原体の純粋な培養物を分離するために、採取した材料に接種します。 播種は、原則として、疑わしい病原体の特性に基づいて選択された高密度栄養培地で行われます。
細菌学的方法では、可能であれば、特定の種類の細菌のみが増殖する培地を使用します。選択培地、または疑わしい病原体を他の微生物と区別できる培地、または鑑別診断培地です。
たとえば、細菌学的診断では 腸の感染症-エンド培地、テルライト培地はジフテリア菌などを分離するために使用されます。日和見微生物が細菌学的方法で分離される場合、採取された材料の播種はユニバーサル栄養培地で行われます。 そのような培地の例は血液寒天培地です。
細菌培養物の分離に関連するすべての操作は、バーナーの炎上で実行されます。
細菌学的方法では、栄養培地への材料の接種は、ガラスまたは金属のへらを使用するか、または試験材料に存在する細菌が栄養培地の表面に分散するように細菌ループを使用して実行されます。 そのような分散の結果として、各細菌細胞は環境のそれ自身の部分に入ります。
外来微生物叢で著しく汚染されている病理学的物質から病原体の純粋な培養物を分離する場合、生物学的方法を使用して純粋な培養物を分離することがよくあります。 これは次のように行われます。病原体に敏感な実験動物に試験物質を感染させます。 もう1つの例 生物学的方法-喀痰中の肺炎球菌の含有量について患者を検査する場合、材料は白いマウスに腹腔内投与されます。 肺炎球菌の純粋な培養物は、4〜6時間後に血液から得られます。
細菌学的研究の結果、少量の病原体の含有量が試験物質に予想される場合、その蓄積のために液体栄養培地に接種が行われ、いわゆる濃縮が行われます。この微生物に最適な培地。 次に、液体栄養培地からペトリ皿に注がれた固体培地への再播種が行われます。 病原体を接種した培地は、通常は特定の温度のサーモスタットに入れられます。これは、細菌学的方法にとって重要です。
細菌学的研究方法の第2段階では、高密度の栄養培地で増殖し、1つの細菌細胞に由来する細菌コロニーの研究が行われます。 （コロニーであり、病原体の純粋な培養物です）。 コロニーの顕微鏡的および巨視的検査は、反射光および透過光で実施されます。肉眼で、低倍率の顕微鏡下で、拡大鏡を使用します。
コロニーの文化的特性が注目されます：それらの形状、サイズ、色、エッジと表面の性質、構造、一貫性。 さらに、対象となる各コロニーの一部を使用して塗抹標本を作成します。 グラムスミアは顕微鏡で染色され、分離された培養物の着色（色との関係）および形態学的特性を決定し、同時にその純度をチェックします。
コロニーの残りの部分は、より完全な研究のために純粋な培養物を蓄積するために、この種に最適な培地、例えば、傾斜寒天を試験管に接種されます。 チューブはサーモスタットで18〜24時間移動します。 第二段階では、上記の研究に加えて、成長したコロニーの数がしばしば数えられます。
これは、日和見病原体によって引き起こされる病気では特に重要です。 そのような病気では、十分な量の病理学的物質中のその含有量によってのみ、病原体の主な役割を判断することが許されます。 大量にそして他の植物相に対するこの病原体の優勢。
このような研究を行うために、採取した試験物質の連続希釈液を調製し、そこから栄養培地を含むカップに播種し、増殖したコロニーの数を数え、希釈液を掛けて、そこから微生物の含有量を計算します。材料で決定されます。
病原体の分離された純粋な培養物の同定、およびこの培養物に対する抗生物質および他の化学療法薬に対する感受性の決定は、細菌学的方法の第3段階です。 分離された細菌培養物は、着色、形態学的、生化学的、文化的、毒素産生性、抗原性によって識別されます。
最初のステップは、寒天斜面で増殖した培養物から塗抹標本を採取し、細菌の形態を調べ、増殖した細菌の培養物の純度を確認することです。 次に、分離された純粋な細菌培養物をヒス培地に接種します。 生化学的特性を決定するために他の培地に接種することが望ましい。
バクテリアの酵素的または生化学的特性は、タンパク質、炭水化物の分解に関与する酵素によるものであり、さまざまな基質の還元と酸化を引き起こします。
さらに、各タイプのバクテリアは、一定の酵素セットを生成します。 ほとんどの場合、抗原特性を研究するとき、ガラス上での凝集反応が使用されます。
微生物の毒素形成は、invivoまたはinvitroでの抗毒素による毒素中和反応を使用して決定されます。 場合によっては、他の病原性因子も研究されます。 細菌学研究所で実施されている上記の研究により、病原体の属または種類を特定することができます。
感染源の検出を含め、病気の流行連鎖を特定するために、細菌の種内特定が行われます。 細菌の種内同定の本質は、食作用または食型を決定することです、研究 さまざまなプロパティ分離された抗原性細菌。 ファージタイプを決定するプロセスは、ファージタイピングと呼ばれます。 腸チフスでは、ファージタイピングが行われます。 ブドウ球菌感染症、paratypheB。
スパチュラで分離された純粋な培養物が播種された栄養培地の入ったカップに、さまざまな診断用ファージを一滴ずつ適用します。 培養物がこのファージに感受性がある場合、細菌学的検査の結果として、破壊された細菌の丸い領域の形成のように見える、いわゆる陰性コロニー（プラーク）が観察されます。 病原体培養物は、いくつかまたは1つのファージに感受性がある可能性があります。
薬剤耐性菌が広く蔓延しているため、合理的な化学療法を任命するには、病原体の単離された純粋培養物の化学療法薬に対する耐性または感受性の薬剤感受性を決定する必要があります。 薬剤感受性試験では、ペーパーディスク法または最も正確で面倒な段階希釈法のいずれかが使用されます。
ペーパーディスク法は、抗生物質を含浸させたディスク周辺の細菌増殖を阻害するゾーンの特定に基づいています。 連続希釈法を使用する場合は、化学製剤（液体栄養培地を含む抗生物質）を試験管で希釈した後、同数の細菌を試験管に接種します。 細菌の増殖の有無により、結果が記録されます。 菌株の同一性を決定するための細菌学的研究方法の結果として、得られた薬剤感受性は疫学的目的にも役立つ可能性があります。
材料の一部で病原体を検出できない可能性があるため、バクテリオキャリアを検出するときに繰り返し研究を行うことができます。
現在 現代世界バクテリアの種類と属を決定するための加速された方法があります。 したがって、ロシアでは、彼らはインジケーターペーパーのシステムを使用しています-NIB、これは6〜12時間後に使用せずに許可します 多数純粋な細菌培養物を分離するための培地。 免疫蛍光法は、感染症の迅速な診断にも広く使用されています（血清学的研究を参照）。
細菌学的研究方法（BLMI）-栄養培地での培養による細菌の純粋な培養物の分離と、微生物の形態学的、文化的、生化学的、遺伝的、血清学的、生物学的、生態学的特性の研究に基づく種へのそれらの同定に基づく方法。
感染症の細菌学的診断は、保健省によって承認された標準的な診断スキームを使用して実行されます。
純粋な文化-栄養培地で増殖した同種の細菌で、その特性は現在研究中です。
歪み-特定のソースから分離された、同じ種の微生物の特定された純粋な培養物 一定時間。 同じ種の菌株は、生化学的、遺伝的、血清学的、生物学的、およびその他の特性、ならびに分離の場所と時間においてわずかに異なる可能性があります。
BLMIの目標：
1.病因診断：微生物の純粋培養物の分離とその同定。
2.定義 追加のプロパティたとえば、抗生物質やバクテリオファージに対する微生物の感受性。
3.微生物の数の決定（UPMによって引き起こされる感染症の診断において重要）。
4.微生物のタイピング、すなわち、研究に基づく種内差異の決定 遺伝的と 疫学（fagovarsおよびserovars） マーカー。これは、さまざまな病院、地理的地域で、さまざまな患者や外部環境のさまざまなオブジェクトから分離された微生物の共通性を確立できるため、疫学的目的で使用されます。
BLMIにはいくつかの段階があります。好気性菌、通性嫌気性菌、偏性嫌気性菌では異なります。
I.好気性菌と通性嫌気性菌の純粋培養の分離におけるBLMIの段階。
ステージ。
A.材料の収集、輸送、保管、前処理。場合によっては、播種前に、分離された微生物の特性を考慮して、材料の選択的処理が実行されます。 たとえば、喀痰または他の物質の耐酸性結核菌の存在を調べる前に、その物質を酸またはアルカリ溶液で処理します。
B.濃縮培地への播種（必要に応じて）血液培養を分離する場合など、試験物質に少量の細菌が含まれている場合に実行されます。 これを行うために、大量の発熱（成人で8-10 ml、子供で4-5 ml）で採取された血液は、1：10の比率で培地に接種されます（殺菌作用を克服するため）要因）; 播種は37℃の温度で18〜24時間培養されます。
B.試験材料の顕微鏡検査。塗抹標本は、試験材料から調製され、グラムまたは他の方法によって染色され、顕微鏡検査される。 現在のミクロフローラ、その量を評価します。 さらなる研究の過程で、一次塗抹標本に存在する微生物を分離する必要があります。
G.孤立したコロニーを得るために栄養培地に播種する。分離されたコロニーを得るために、鑑別診断または選択培地を用いたプレート上で機械的に分離することにより、材料にループまたはスパチュラを接種します。 播種後、皿を逆さまにして（コロニーを凝縮液の液滴で汚さないようにするため）、署名し、37℃の温度で18〜24時間サーモスタットに入れます。
微生物培養物を播種して再播種するときは、栄養培地の汚染を防ぎ、他人の感染や自己感染を防ぐために、無菌規則の遵守に注意を向ける必要があることを覚えておく必要があります。
日和見微生物によって引き起こされる感染症の場合、病理学的物質に存在する微生物の数が重要であり、物質の定量的接種が行われ、そのために物質の一連の100倍希釈（通常は3希釈）が準備されます試験管内の無菌等張塩化ナトリウム溶液中。 その後、各希釈液の50μlをペトリ皿の栄養培地に播種します。
ステージ。
A.培地上のコロニー形態型の研究、それらの顕微鏡検査。彼らは皿をのぞき、最適な栄養培地、成長速度、そして微生物の成長の性質に気づきます。 勉強することを選択します 脳卒中に沿って、中心に近い孤立したコロニー。いくつかのタイプのコロニーが成長する場合、それぞれが別々に検査されます。 コロニーの兆候を評価します（表7）。 必要に応じて、作物の入った皿を拡大鏡を通して、または低倍率レンズと絞りを絞った顕微鏡を使用して観察します。 彼らはコロニーの異なる形態型の着色特性を研究します;これのために、研究中のコロニーの一部が準備されます 塗抹標本、グラムまたは他の方法で顕微鏡で染色し、培養物の純度の形態を決定します。必要に応じて、 ガラス上の指標RA多価血清で。
B.純粋な培養の蓄積。純粋な培養物を蓄積するために、すべての形態型の単離されたコロニーを、傾斜寒天または他の栄養培地を含む別々の試験管に継代培養し、+ 37℃のサーモスタットでインキュベートします（この温度はほとんどの微生物に最適ですが、異なる場合があります、たとえば、 Campylobacteriumspp。-+ 42 0 C、 カンジダ属 と ペスト菌 -+ 25 0 C）。
クリグラー培地は通常、腸内細菌の蓄積培地として使用されます。
クリグラー培地の組成： MPA、0.1％グルコース、1％ラクトース、硫化水素試薬（硫酸鉄+チオ硫酸ナトリウム+亜硫酸ナトリウム）、フェノールレッドインジケーター。 培地の初期色はラズベリーレッドで、培地は試験管内で「傾斜」しています。柱（2/3）と斜角の表面（1/3）があります。
クリグラーの培地への播種は、表面のストロークとカラムへの注入によって行われます。
ステージ。
A.蓄積培地での増殖の説明、培養物の純度の評価グラム染色で。 成長パターン分離された純粋な培養。 視覚的にきれいな培養は、均一な成長が特徴です。 で 顕微鏡検査そのような培養物から調製された染色された塗抹標本、形態学的および着色的に均質な細胞が、異なる視野でその中に見出される。 ただし、一部の種類の細菌に固有の顕著な多形性の場合、異なる形態の細胞が純粋な培養物からの塗抹標本で同時に発生する可能性があります。
蓄積培地としてクリグラーインジケーター培地を使用した場合、カラム内の色の変化と面取りされた部分が評価され、それに応じて生化学的特性が決定されます：グルコース、ラクトースの発酵、硫化水素の生成。 乳糖が分解すると培地の傾斜部分が黄色になり、ブドウ糖が分解するとカラムが黄色になります。 糖の分解中にCO2が生成されると、気泡やカラムの破損が発生します。 硫化水素の製造の場合、硫酸第一鉄が硫化第一鉄に変換されるため、注入に沿って黒化が見られます。
クリグラー培地の色の変化の性質（図23）は、微生物による窒素物質の分解の不均等な強度と、好気性（傾斜面上）および嫌気性（傾斜面上）および嫌気性下でのアルカリ生成物の形成によって説明されます。列）条件。
好気性条件下では、中型カラムよりも傾斜面でより強いアルカリ形成が起こります。 したがって、培地中に少量存在するグルコースの分解中に、斜角のある表面に形成された酸は急速に中和されます。 同時に、高濃度の培地に存在するラクトースの分解中に、アルカリ性生成物は酸を中和することができません。
カラム内の嫌気性条件下では、アルカリ性生成物がわずかな量で生成されるため、ここでグルコース発酵が検出されます。
米。 23。クリグラーインジケーター媒体：
1-初期、
2-成長とともに 大腸菌
3-成長とともに S.パラチフスB、
4-成長とともに 腸チフス
大腸菌ブドウ糖と乳糖をガス生成で分解し、硫化水素を生成しません。 それらは、媒体の破損を伴うカラムおよび斜角部分の黄変を引き起こします。
パラチフスグルコースをガス生成で分解し、ラクトース陰性。 それらは破損を伴うカラムの黄変を引き起こし、斜角部分は色を変えず、ラズベリーのままです。 ここで S.パラチフスB硫化水素を生成します（注入中に黒色が表示されます）、 パラチフス熱A硫化水素は生成されません。
腸チフスガスを生成せずにグルコースを分解し、ラクトース陰性で、硫化水素を生成します。 それらはカラムを途切れることなく黄色に変え、斜角部分は色を変えず、ラズベリーのままであり、注入中に黒色が現れます。
赤痢菌属グルコース陽性、ラクトース陰性、硫化水素を生成しません。 それらはカラムの黄変を引き起こし（血清型に応じて切れ目がある場合とない場合）、斜角部分は色を変えず、真っ赤なままです。
B.純粋な培養の最終的な識別（種または変異体のレベルに対する分離された微生物の体系的な位置の決定） 抗生物質に対する分離培養の感度スペクトルの決定。
この段階で純粋な培養物を特定するために、生化学的、遺伝的、血清学的、生物学的特性が研究されています（表8）。
日常の実験室での実践では、識別中にすべての特性を研究する必要はありません。 有益でアクセス可能な、 簡単なテスト、単離された微生物の種（変異体）の所属を決定するのに十分です。
これは、検査室診断で使用される主な方法です。 感染症。 細菌学的研究方法の本質は、患者からの病理学的物質の播種と病原体の純粋な培養物の分離、それに続く形態学的、文化的、着色的、生化学的および抗原的特徴による同定です。
純粋な培養物を分離する方法は、特定の種類の微生物を1つまたは別の自然の生息地から分離することを可能にします。 最も重要な方法微生物学的研究。 純粋な培養物を分離する方法を最初に提案したのはL.パスツールでした。
パスツール法は、液体栄養培地の使用に基づいており、主に1種類の微生物を含む材料（たとえば、敗血症の血液など）から純粋な培養物を確実に分離しました。 個々の種類の微生物をそれらの混合物から分離する必要がある場合、それはあまり効果的ではありませんでした。 一方、自然条件下では、細菌学的検査の材料（喀痰、膿、土壌、水など）には、ほとんどの場合、さまざまな微生物の混合物が含まれています。
1881年にこの目的で使用したRobertKoch（R。Koch）による純粋な培養物の分離方法の改善により、細菌混合物の分離と個々の種の分離研究の成功が可能になりました。 固形栄養培地播種中に、個々の微生物細胞が互いに分離されるように材料を分配することが可能です。 適切な条件下（栄養培地、最適温度）で、単離された細胞の繁殖は同じ種の子孫を与えます。 与えられた微生物種の純粋な培養.
一定期間後（ほとんどの場合1日）、孤立した細胞が見つかった高密度の栄養培地の場所で、増殖した微生物の集団が形成されます-いわゆる コロニー、肉眼で見ることができます。 それらは、微生物の混沌とした蓄積を表すものではありません。これは、多くの種類の微生物にとってコロニーが特徴的な構造を持っているという事実によってすでに判断できます。これにより、調査中の材料の植物相を大まかに決定し、それらを選択することができます。さらなる研究の対象となるコロニー。 適切な栄養培地にそのようなコロニーを再播種することは、純粋な培養物の分離です。
純粋な培養物の分離とその後の同定は、感染症の診断において最も重要であり、それらの迅速な認識、タイムリーな治療および予防を確実にします。 環境オブジェクト（空気、水、土壌など）の衛生状態と衛生状態の研究、および科学的研究において、ミクロフローラを決定することはそれほど重要ではありません。
純粋な培養物を分離するための多くの方法が現在利用可能です。 それらのいくつかは限られた範囲で使用され、他は 幅広いアプリケーション。 最も一般的なのは、純粋な細菌培養物を分離するための以下に説明する方法です（Drigalskyの方法）。 他の微生物（スピロヘータ、原生動物）は、特別な分離方法を使用する必要があるか、人工栄養培地（一部の原生動物、リケッチア、ウイルス）ではまったく分離できません。
微生物混合物から純粋な培養物を分離する方法は、通常、2つの主要なグループに分けられます。栄養培地での微生物の機械的分離の原理に基づく方法と、微生物の生物学的特性の使用に基づく方法です。 最初のグループには、個々の細胞を分離する方法が含まれます。1）栄養培地の深さ。 2）媒体の表面上および3）目の制御下。 2番目のグループは、微生物の移動性、温度に対する態度、酸素、病原性などの微生物の特性を使用します。
播種および再播種技術
播種することによって微生物学の実践では、微生物を検出するための無菌栄養培地への試験物質の導入と呼ばれます。
再シード培養微生物の無菌環境への移動です。 微生物の培養と継代培養は、微生物学の実践において最も一般的な方法の1つです。
再播種は、異物が空気中や周囲の物体の表面から栄養培地に侵入しないように行われます。 このためには、厳守する必要があります 次のトリック:
1）作物は、火のついたバーナーのすぐ近くで作られ、その炎の中で、ループ、ピンセット、綿のプラグ、試験管の端が滅菌されます。
2）で 左手継代培養で一方の試験管を取り、もう一方（滅菌栄養培地を含む）を親指と人差し指の間で傾斜した位置に保ちます。
3）ループはバーナーの炎の上で垂直位置に保持され、その金属部分は赤熱で煆焼され、次に水平に傾けられ、ループホルダーは滅菌されます。
4）綿栓を取り出し、右手の薬指と小指で押さえます。 テーブルや物にコルクを置くことはお勧めしません。
5）両方のチューブの端を燃やします。
6）壁に触れずに注意深く継代培養する培養物を試験管にループを導入し、固体培地上に液体の液滴または少量のプラークを捕捉し、壁に触れないようにして、2番目に移します枯渇した栄養培地を備えた試験管;
7）ループを外し、試験管の端とストッパーの内側の端を焼きます。 綿栓に火がついたら、それで試験管を閉じ、手またはピンセットで外端を消します。
8）ループが再び炎の中で発射され、適切な碑文が試験管に作成されます：文化の名前と播種の日付。
液体培地での播種パスツールまたは目盛り付きピペットで製造できます。 パスツールピペットを使用する場合は、焦げたピンセットを使用して密封された端を破り、ピペット全体を軽く燃やします。 培養物の入った試験管を左手に置き、右手に親指と中指の間にピペットを入れて持ちます。 トップホール人差し指。
試験管から綿栓を外した後、試験管の端を焼きます。 ピペットを慎重に試験管に下げ、人差し指を外します。 次に、人差し指でピペットの上部開口部を閉じ、試験管から取り外します。 綿栓と試験管の端は、閉じる前に焼成されます。 試験材料を液体媒体に移します。 接種後、ピペットは消毒液に入れられます。
固形培地への播種。斜め寒天に播種する場合は、直線またはジグザグのストロークが適用されます。 これを行うために、接種された材料を含むループが、凝縮水が底に蓄積するまで試験管に導入され、寒天を緩めることなく注意深くストロークが適用されます。 固体接種は、傾斜寒天の表面全体に接種物を塗ることによって得られます。
ペトリ皿の高密度培地で、以下のように接種を行う。 試験管内の栄養培地を沸騰水浴で溶かし、48〜50℃に冷却し、高さ3〜5mmの均一な層の滅菌カップに注ぎます。 固化した培地を密閉カップ内のサーモスタットで20〜30分間乾燥させます。 開いたカップは、滅菌紙で覆われたサーモスタットの棚に逆さまに置かれます。 蓋はカップの隣に置かれます。 乾燥中、凝縮水は栄養培地の表面とカップの内面から蒸発します。 播種は、平行ストロークの形のループまたはガラスヘラで行われます。
微生物の種類を決定するとき、そして嫌気性菌を成長させるために、それらは生成します 注射による播種寒天またはゼラチンのカラムで。 これを行うには、試験管を逆さまにし、培地のカラムを接種材料付きの長い真っ直ぐな針で上から下、そして一番下まで突き刺します。 次に、針を慎重に取り外し、焦げた綿のプラグで試験管を閉じます。 感染に対する特別な予防措置が必要な場合は、純粋な培養物を再播種するための特別なキャビネットで作物が実行されます。 接種したチューブとペトリ皿を成長インキュベーターに入れます。
栄養培地の内部またはその表面にある微生物および胞子は移動できませんが、凝固時の場所にとどまります。 各細胞または胞子は増殖し始め、2〜3日後に形成されます コロニー- 大量同じタイプのセル。 コロニーが単一の細胞から形成された場合、それはその細胞から増殖した微生物の純粋な培養物になります。
成長しているコロニーは、最初に肉眼で観察され、次に虫眼鏡または顕微鏡で観察されます。 同時に、コロニーの外観、色、構造などが異なることに気付かないことは不可能です。
細菌学的方法を使用することにより、純粋な培養物中の病原体を患者から得られた材料から分離し、特性の複合体の研究に基づいてそれを特定することが可能になります。 ほとんどの細菌は、さまざまな人工栄養培地（クラミジアとリケッチアを除く）で培養できるため、多くの感染症の診断には細菌学的方法が重要です。
陽性の結果が得られた場合、細菌学的方法により、抗菌薬に対する分離された病原体の感受性を決定することが可能になります。 ただし、この調査の有効性は、多くのパラメータ、特に 収集条件そして彼の 交通研究室へ。
に 基本的な要件細菌学的検査のための材料の選択と輸送の要件は次のとおりです。
- 病因治療の開始前に材料を服用する。
- 材料を収集する際の無菌状態の遵守。
- 材料収集の技術的正確性。
- 十分な量の資料。
- 材料の保管と輸送の温度レジームを確保する。
- 材料の収集と高密度栄養培地への播種の間の最小時間間隔への短縮。
実験室への材料の輸送は、できるだけ早く、ただし、摂取後1〜2時間以内に実行する必要があります。 材料のサンプルは特定の温度でなければなりません。 特に、通常は無菌の材料（血液、脳脊髄液）が保管され、37°Cで検査室に送られます。 非滅菌材料（尿、分泌物） 気道など）は、室温で1〜2時間以内、または4°C（家庭用冷蔵庫の状態）で1日以内に保管されます。 所定の時間枠内にサンプルを実験室に届けることが不可能な場合は、保存条件下で病原体の生存率を維持するように設計された輸送媒体を使用することをお勧めします。
研究のための血体温の上昇中、発熱の開始時に患者から採取する必要があります。 4〜6時間の間隔で採取された3〜4の血液サンプルを検査することをお勧めします。これは、一過性細菌血症を「見逃す」リスクを減らし、分離された血液の病因的役割を確認する能力を高めるという観点から合理的です。 条件付き病原性微生物叢このミクロフローラが静脈血のいくつかのサンプルで見つかった場合。 成人で10ml、子供で5mlの血液サンプルを、好気性および嫌気性微生物用の培地を1:10の比率で少なくとも2つのバイアルに接種します。 動脈血の単一の研究も望ましいです。
取った 脳脊髄液 （CSJ）は、乾燥した滅菌チューブ内で1〜2mlの腰椎穿刺を行う医師によって作成されます。 サンプルはすぐに研究所に送られ、そこで研究もすぐに開始されます。 これが不可能な場合は、材料を37°Cで数時間保管します。 量が大幅に増加します 肯定的な結果細菌学的検査、グルコースを含む半液体培地を含む試験管、および「血液」寒天を含むペトリ皿への1〜2滴のCSFの接種。 材料を送るために、等温ボックス、加熱パッド、魔法瓶、または温度が約37°Cに維持されるその他のパッケージが使用されます。
排泄物細菌学的検査のために、それらは3-5gの量の無菌の木製へらでしっかりと閉じられた蓋のある無菌の容器に入れられます。 採取した材料の調査は2時間以内に開始する必要があります。この時間内に調査を開始できない場合は、少量の材料を採取して適切な輸送媒体に入れる必要があります。 糞便を選択するときは、研究のために病理学的不純物（粘液、膿、上皮粒子など）を送り、殺菌性のある血液不純物が材料に侵入するのを避けるように努める必要があります。
材料を取るために、直腸スワブ（綿棒付き）を使用することができます。 綿棒は、滅菌等張塩化ナトリウム溶液または輸送媒体（オイルゲルではない）で湿らせる必要があります。 直腸ごとに5〜6 cmの深さまで導入し、タンポンを回して慎重に取り外し、タンポンの糞便の色の外観を制御します。 材料の研究が2時間以内に開始される場合、綿棒は乾燥した試験管に入れられます。それ以外の場合は、輸送媒体に入れられます。
尿（自由に放出された尿の平均的な部分）3〜5 mlの量は、外性器の完全なトイレの後、滅菌皿に集められます。 朝の尿をとることが望ましいです。
胆汁中に収集 十二指腸の響き無菌試験の規則を守りながら、治療室でA、B、Cの部分を別々に3本の滅菌試験管に入れます。
胃の水を洗う 20〜50mlの量で滅菌ジャーに収集されます。 これらの場合の胃洗浄は、無関心な（微生物に対する静菌効果または殺菌効果を持たない）溶液、できれば沸騰水（ソーダ、過マンガン酸カリウムなどを添加しない）でのみ実行されることに留意する必要があります。
喀痰。 咳の発作中に放出された朝の痰は、無菌の瓶に集められます。 咳をする前に、患者は歯を磨き、沸騰したお湯で口をすすぎ、食物の残骸、剥離した上皮、および微生物叢を機械的に除去します。 口腔.
気管支の紅潮。 気管支鏡検査では、5 ml以下の等張塩化ナトリウム溶液を注入し、続いて滅菌チューブに吸引します。
咽頭、口腔および鼻の排出。 口腔からの物質は、空腹時または粘膜からの滅菌綿棒またはスプーンで食べてから2時間後、唾液腺の管の入り口、舌の表面の患部に採取されます。痛みから。 フィルムがある場合、後者は滅菌ピンセットで除去されます。 鼻腔からの材料は、鼻腔の奥深くに挿入された乾燥した滅菌綿棒で採取されます。 鼻咽頭からの材料は、無菌の後咽頭綿棒で採取され、鼻の開口部から鼻咽頭に注意深く挿入されます。 咳が同時に始まる場合、咳が終わるまで綿棒は取り除かれません。 ジフテリアの分析を行うために、鼻と咽頭からのフィルムと粘液を同時に検査し、異なる綿棒で材料を採取します。
試験材料は、微生物の個々のコロニーの成長を得るために特別な技術を使用して高密度栄養培地に接種され、その後、病原体の純粋な培養物を単離するためにふるいにかけられる。
特定の種類の細菌は、外来微生物の増殖を遅らせる、または特定の病原性微生物の増殖を刺激する物質を含む選択的（選択的）培地を使用して分離されます。
栄養培地で分離された微生物 識別、つまり それらの種またはタイプの所属を決定します。 V 近々医療現場での識別には、マイクロテストシステムが使用されます。マイクロテストシステムは、一連の鑑別診断環境を備えたパネルであり、研究をスピードアップします。 マイクロテストシステムは、液体栄養培地で抗生物質を希釈することにより、抗菌薬に対する微生物の感受性を決定するためにも使用されます。
細菌学的研究の結果を評価するとき、医師は、否定的な結果が必ずしも病原体の不在を意味するわけではなく、抗菌薬の使用、高い血中殺菌活性、および技術的エラーに関連している可能性があることを考慮に入れる必要があります。 との関係から外れた患者からの物質中の病原性微生物の検出 臨床像回復期、健康または一過性の細菌運搬の場合に可能です。
無菌のすべての規則に従い、条件付きで病原性の微生物（表皮黄色ブドウ球菌、 大腸菌）そして腐生植物でさえ、細菌血症の症状と見なされるべきです。特に、これらの微生物が複数の物質サンプルまたは異なる基質（血液、尿）に見られる場合、体の免疫反応性が低下すると、これらおよび他の「非病原性」 「微生物は病原体になる可能性があります 感染プロセス、敗血症を含む。
ある難しさは 非滅菌培地の細菌学的検査の結果の解釈つまり、日和見微生物の病因的役割の証明です。 この場合、分離された培養物のタイプ、材料中の特定のタイプの微生物細胞の数、病気の経過中に繰り返される分離、単一培養の存在、または微生物の関連などの指標が取り入れられます複合体のアカウント。
Yushchuk N.D.、Vengerov Yu.Ya.