文化調査方法培養による特定の種類の細菌の栄養培地からの分離と、その後の種の同定です。 細菌の種類は、その構造、文化的および環境的データ、ならびに遺伝的、生化学的および生物学的指標を考慮して決定されます。 細菌学的診断には、保健省によって承認されたスキームが使用されます。

栄養培地に由来する新種の細菌は、その特性がまだ決定されていませんが、 純粋な文化。 それらの特徴の最終的な識別の後、バクテリアは特定の場所と 一定時間、名前を取得します 歪み。この場合、1つの種の菌株の分離の特性、場所、または時間のわずかな違いが許容されます。

メソッドの目的:

1. 病因診断、つまり、細菌の純粋な培養物の分離と同定。

2. 微生物の数とそれらの特別な特性の決定。 たとえば、抗生物質に対する特定の反応。

3. 微生物の疫学的および遺伝的要素に基づく、微生物の属内差異の特定。 これは、さまざまな場所やさまざまな条件で分離された微生物の共通性を判断するために必要であり、疫学的目的にとって重要です。

この研究方法には一定の段階があり、好気性菌、通性嫌気性菌、および義務的好気性菌では異なります。

好気性および通性好気性細菌の純粋培養を繁殖させます。

ステージ1

A） 準備活動。 この段階には、材料の収集、保管、輸送が含まれます。 また、必要に応じて、調査対象の細菌の特性に応じて処理することができます。 たとえば、結核の材料を調べる場合、耐酸性の微生物を特定するためにアルカリ性または酸性の溶液が使用されます。

B） エンリッチメント。 この段階は任意であり、試験材料中の細菌の数が本格的な研究を実施するのに十分でない場合に実行されます。 例えば、血液培養を分離する場合、試験血液は1対10の比率で培地に入れられ、37℃の温度で1日保存されます。

V） 顕微鏡検査。 試験材料の塗抹標本を染色し、顕微鏡で検査します。マイクロフローラ、その特性、および量を検査します。 将来的には、一次塗抹標本から、その中のすべての微生物を別々に分離する必要があります。

G） 別々のコロニーの作成。 材料は、特別な選択的な媒体でカップに適用されます。これには、ループまたはスパチュラが使用されます。 次に、コロニーを凝縮から保護するためにカップを逆さまに置き、37°C​​の温度を維持しながら約20時間サーモスタットに保管します。

重要！研究の過程で、隔離の規則を守る必要があることを覚えておく必要があります。 一方で、試験材料と除去されるバクテリアを保護するため、そして他方で、周囲の人と外部環境の汚染を防ぐために。

条件付きの病原性微生物に関しては、それらが除去されるとき、それらの量的特性が重要です。 この場合、定量的シードが実行され、材料の数百倍希釈が等張塩化ナトリウム溶液で実行されます。 その後、50μlのペトリ皿に播種します。

ステージ2

A ）培地中のコロニーの形態学的特性とそれらの顕微鏡検査の研究。 皿が調べられ、微生物の特性、それらの数、成長速度、および最も適切な栄養培地が記録されます。 研究には、中心に近いコロニーを選択するのが最善であり、いくつかのタイプの純粋な培養物が形成されている場合は、それぞれを別々に研究します。培養物の形態型の純度を研究するには、コロニー塗抹標本を使用して染色します（通常はグラム法または他の方法を使用して）そして注意深く微視的。

B） 純粋培養の蓄積。 これを行うには、すべての形態型のコロニーを栄養培地とともに別々の試験管に入れ、特定の温度のサーモスタットに保持します（ほとんどの微生物では、37°C​​の温度が適していますが、場合によっては異なる場合があります）。

クリグラーの培地は、蓄積のための栄養培地としてよく使用されます。試験管内で「傾斜した」外観を持ち、その部分の2/3は柱の形をしており、1/3は斜角の表面で明るい赤色になっています。 。 化合物：

· MPA

· 0.1％ブドウ糖

· 1％乳糖

· 硫化水素専用試薬

· フェノールレッドインジケーター。

ステージ3

A） 成長のレベルと文化の純度。 一般的な順序では、派生した純粋な培養物は均一な成長を示し、顕微鏡検査では、細胞は同じ形態学的および着色構造を持っています。 しかし、異なる形態学的構造を持つ細胞がある一方で、顕著な多形性を伴ういくつかのタイプの細菌があります。

クリグラー培地を栄養培地として使用した場合、生化学的特性は、カラムと斜角部分の色を変えることによって決定されます。 たとえば、乳糖が分解すると、斜角部分が黄色になります。ブドウ糖の場合、カラムが黄色になります。 硫化水素の生成に伴い、硫酸塩から硫化鉄への遷移により黒化が発生します。

図からわかるように、クリグラー培地は色が変わる傾向があります。 これは、バクテリアによる窒素物質の分解とアルカリ生成物の形成が、カラム（嫌気性条件）と傾斜面（好気性条件）の両方で不均一に発生するという事実によるものです。

好気性環境（傾斜面）では、嫌気性環境（カラム）よりも活発なアルカリ形成が観察されます。 そのため、ブドウ糖が分解すると、傾斜面の酸が中和されやすくなります。 しかし、濃度がはるかに高い乳糖の分解では、酸を中和することはできません。

嫌気性環境はアルカリ性菌がほとんど出ないので、ブドウ糖がどのように発酵するかを観察できます。

米。クリグラーの栄養培地：

1-初期環境、

2-成長 大腸菌

3 - 成長 S.パラチフスB、

4-成長 S.腸チフス。

E。大腸菌-ガスの形成を伴うブドウ糖と乳糖の分解を促進し、水素を生成しません . 不連続性のある媒体全体の黄変を引き起こします。

S.パラチフス-グルコースの分解を促進し、ラクトース陰性のガスを生成します。 斜角部分は変色せず、柱は黄色に変わります。
パラチフス熱A-硫化水素を生成しません。
S.パラチフスB-硫化水素が生成されます（注入中に黒色が表示されます）。

腸チフス-ブドウ糖はガスを発生させることなく分解し、硫化水素が生成され、乳糖をはじきます。 注入中、斜角部分は色が変化せず、カラムは黄色に変わり、媒体は黒に変わります。

赤痢菌属-乳糖陰性、ブドウ糖陽性、硫化水素は生成されません。 カラムは黄色がかった色になり、斜角部分は同じままです。

B） 純粋培養の最終的な同定と抗生物質に対するその反応。 この段階で、培養物の生化学的、生物学的、血清学的および遺伝的特性が研究されます。

研究の実践では、微生物のすべての特性を研究する必要はありません。 微生物が特定の種に属しているかどうかを判断するには、最も簡単なテストを使用するだけで十分です。

文化的（細菌学的）研究方法-栄養培地で培養することにより、微生物（細菌）の純粋な培養物を分離および同定することを目的とした一連の方法。

純粋な培養物は、同じ種の微生物の集まりです。 ほとんどの場合、純粋な培養物は、単離されたコロニー（単一の微生物細胞の子孫）を選択して培養することによって得られます。

メソッドの手順：

1.研究用資料の収集。

2.純粋培養の分離とその同定。

3.結論。

研究用資料集。研究対象の材料の種類は、研究の目的によって異なります（診断-患者から、疫学分析-環境、食品、患者、および（または）細菌キャリアから）。

純粋培養の分離。 3つまたは4つの段階が含まれています：

1.孤立したコロニーを得るために、高密度の栄養培地（できれば鑑別診断または選択的）を入れたカップに材料を播種します（予備顕微鏡検査後）。 ほとんどの場合、機械的分離の方法で製造されます。 場合によっては（たとえば、血液）、材料は液体濃縮培地に事前に播種され、続いて寒天培地を含むプレート上で継代培養されます。 接種前に材料の選択的処理が行われることもあります（分離された微生物の特性を考慮して、たとえば、耐性菌を分離するための酸またはアルカリによる処理）。 37℃の温度で18〜24時間培養。 の栽培時間 他の種類バクテリアは変動する可能性があります。

2（3）：a）寒天プレート上のコロニーの研究（文化的特徴）、最も典型的なものの選択。 b）染色によるこれらのコロニーからの塗抹標本の調製（グラムまたは他の方法による）。 a）蓄積培地上で研究されたコロニーの残りをスクリーニングし、最適な温度でサーモスタット内で成長させます。

3（4）。 蓄積培地で得られた培養物の純度の研究。 これとともに

目的は、塗抹標本、染色（通常はグラムによる）を準備し、顕微鏡で研究することです

形態学的および着色的均質性（異なる視野で）。

4（5）。 純粋な培養の識別。

結論。参照（典型的な）菌株の特性と比較した特徴の全体に従って、材料から分離された微生物のタイプが示されます。

メソッド評価：

利点：比較的高い感度と精度、試験物質中の微生物の数を決定する能力、および抗生物質に対する感受性。 制限：相対的な期間、この方法は高価です。

21.好気性菌と嫌気性菌の栄養培地。 栄養培地の要件、分類。

要件：

メディアは栄養価が高い必要があります

特定のpHが必要です

等張である必要があります。 培地の浸透圧は細胞の浸透圧と同じでなければなりません。

しっとりしていて、あまりにも流動的であってはなりません

特定の酸化還元電位が必要です

無菌でなければなりません

統一する必要があります。 一定量の個々の成分が含まれています。

栄養培地は分けることができます：

A）起源

1）自然-自然食品（肉、牛乳、ジャガイモ）;

2）人工-微生物を成長させるために特別に調製：-天然物からの培地（肉水、肉-ペプトンブロス（MPB）、肉-ペプトン寒天（MPA）、-一定の組成を持たない;-合成栄養培地-厳密に溶液蒸留水中の定義された量の塩、アミノ酸、窒素塩基、ビタミン-一定の組成を持ち、ワクチン、免疫血清、抗生物質の生産で微生物や細胞培養を成長させるために使用されます。

B）予約制：

1）汎用（MPB、MPA）-ほとんどの微生物はそれらの上で成長します。

2）選択的-混合物からの1種類の微生物の増殖を選択的に促進します（たとえば、ブドウ球菌用の卵黄塩寒天培地）。

3）鑑別診断-1つのタイプの微生物を、環境の外観によって他のタイプから区別できるようにします（たとえば、Endo、腸内微生物グループのLevinメディア）。

また、 使用目的純粋な培養物を分離するためのスキームでは、以下の培地を目的によって区別することができます。

1）濃縮-病原体に関連する微生物の増殖を抑制します。

2）孤立したコロニーを取得する。

3）純粋な培養の蓄積;

B）一貫性：

1）液体;

2）半液体（0.5-0.7％の濃度の寒天を添加）。

3）高密度-1％以上。

細菌学的方法は、病原体（同じ種の細菌を含む集団）の純粋な培養物を分離することから成り、この病原体を特定することが細菌学的研究の主な方法です

特定の体系的なグループ（種、属）に属することを確立するための細菌学研究室での微生物の特性の研究は、それらの同定と呼ばれます。

一般に、細菌学的研究方法は、18〜24時間続く多段階の細菌学的研究です。

細菌学的方法-それはどのように実行されますか？

細菌学的方法では、嫌気性培養物を嫌気性菌に入れます。 バルーンから空気を取り除き、酸素を含まない混合ガスに置き換えます。

基礎 細菌学的方法研究の最初の段階で発生する病原体の純粋な培養物の分離です。 病原体の純粋な培養物を分離するために、採取した材料に接種します。 播種は、原則として、疑わしい病原体の特性に基づいて選択された高密度栄養培地で行われます。

細菌学的方法では、可能であれば、特定の種類の細菌のみが増殖する培地を使用します。選択培地、または疑わしい病原体を他の微生物と区別できる培地、または鑑別診断培地です。

たとえば、細菌学的診断では 腸の感染症-エンド培地、テルライト培地はジフテリア菌などを分離するために使用されます。日和見微生物が細菌学的方法で分離される場合、採取された材料の播種はユニバーサル栄養培地で行われます。 そのような培地の例は血液寒天培地です。

細菌培養物の分離に関連するすべての操作は、バーナーの炎上で実行されます。

細菌学的方法では、栄養培地への材料の接種は、ガラスまたは金属のへらを使用するか、または試験材料に存在する細菌が栄養培地の表面に分散するように細菌ループを使用して実行されます。 そのような分散の結果として、各細菌細胞は環境のそれ自身の部分に入ります。

外来微生物叢で著しく汚染されている病理学的物質から病原体の純粋な培養物を分離する場合、生物学的方法を使用して純粋な培養物を分離することがよくあります。 これは次のように行われます。病原体に敏感な実験動物に試験物質を感染させます。 もう1つの例 生物学的方法-喀痰中の肺炎球菌の含有量について患者を検査する場合、材料は白いマウスに腹腔内投与されます。 肺炎球菌の純粋な培養物は、4〜6時間後に血液から得られます。

細菌学的研究の結果、少量の病原体の含有量が試験物質に予想される場合、その蓄積のために液体栄養培地に接種が行われ、いわゆる濃縮が行われます。この微生物に最適な培地。 次に、液体栄養培地からペトリ皿に注がれた固体培地への再播種が行われます。 病原体を接種した培地は、通常は特定の温度のサーモスタットに入れられます。これは、細菌学的方法にとって重要です。

細菌学的研究方法の第2段階では、高密度の栄養培地で増殖し、1つの細菌細​​胞に由来する細菌コロニーの研究が行われます。 （コロニーであり、病原体の純粋な培養物です）。 コロニーの顕微鏡的および巨視的検査は、反射光および透過光で実施されます。肉眼で、低倍率の顕微鏡下で、拡大鏡を使用します。

コロニーの文化的特性が注目されます：それらの形状、サイズ、色、エッジと表面の性質、構造、一貫性。 さらに、対象となる各コロニーの一部を使用して塗抹標本を作成します。 グラムスミアは顕微鏡で染色され、分離された培養物の着色（着色との関係）および形態学的特性を決定し、同時にその純度をチェックします。

コロニーの残りの部分は、より完全な研究のために純粋な培養物を蓄積するために、この種に最適な培地、例えば、傾斜寒天を試験管に接種されます。 チューブはサーモスタットで18〜24時間移動します。 第二段階では、上記の研究に加えて、成長したコロニーの数がしばしば数えられます。

これは、日和見病原体によって引き起こされる病気では特に重要です。 そのような病気では、十分な量の病理学的物質中のその含有量によってのみ、病原体の主な役割を判断することが許されます。 大量にそして他の植物相に対するこの病原体の優勢。

このような研究を行うために、採取した試験物質の連続希釈液を調製し、そこから栄養培地を含むカップに播種し、増殖したコロニーの数を数え、希釈液を掛けて、そこから微生物の含有量を計算します。材料で決定されます。

病原体の分離された純粋な培養物の同定、およびこの培養物に対する抗生物質および他の化学療法薬に対する感受性の決定は、細菌学的方法の第3段階です。 分離された細菌培養物は、着色、形態学的、生化学的、文化的、毒素産生性、抗原性によって識別されます。

最初のステップは、傾斜寒天上で増殖した培養物から塗抹標本を採取し、細菌の形態を調べ、増殖した細菌の培養物の純度を確認することです。 次に、分離された純粋な細菌培養物をヒス培地に接種します。 生化学的特性を決定するために他の培地に接種することが望ましい。

バクテリアの酵素的または生化学的特性は、タンパク質、炭水化物の分解に関与する酵素によるものであり、さまざまな基質の還元と酸化を引き起こします。

さらに、各タイプのバクテリアは、一定の酵素セットを生成します。 ほとんどの場合、抗原特性を研究するとき、ガラス上での凝集反応が使用されます。

微生物の毒素形成は、invivoまたはinvitroでの抗毒素による毒素中和反応を使用して決定されます。 場合によっては、他の病原性因子も研究されます。 細菌学研究所で実施されている上記の研究により、病原体の属または種類を特定することができます。

感染源の検出を含め、病気の流行連鎖を特定するために、細菌の種内特定が行われます。 細菌の種内同定の本質は、食作用または食型を決定することです、研究 さまざまなプロパティ分離された抗原性細菌。 ファージタイプを決定するプロセスは、ファージタイピングと呼ばれます。 腸チフスでは、ファージタイピングが行われます。 ブドウ球菌感染症、paratypheV。

スパチュラで分離した純粋培養物を播種した栄養培地の入ったカップに、さまざまな診断用ファージを一滴ずつ適用します。 培養物がこのファージに感受性がある場合、結果として 細菌学研究いわゆるネガティブコロニー（プラーク）が観察されます。これは、破壊されたバクテリアの領域の丸みを帯びた形成のように見えます。 病原体培養物は、いくつかまたは1つのファージに感受性がある可能性があります。

薬剤耐性菌が広く蔓延しているため、合理的な化学療法を任命するには、病原体の単離された純粋培養物の化学療法薬に対する耐性または感受性の薬剤感受性を決定する必要があります。 薬剤感受性試験では、ペーパーディスク法または最も正確で面倒な段階希釈法のいずれかが使用されます。

ペーパーディスク法は、抗生物質を含浸させたディスク周辺の細菌増殖を阻害するゾーンの特定に基づいています。 連続希釈法を使用する場合は、化学製剤（液体栄養培地を含む抗生物質）を試験管で希釈した後、同数の細菌を試験管に接種します。 細菌の増殖の有無により、結果が記録されます。 菌株の同一性を決定するための細菌学的研究方法の結果として、得られた薬剤感受性は疫学的目的にも役立つ可能性があります。

材料の一部で病原体を検出できない可能性があるため、バクテリオキャリアを検出するときに繰り返し研究を行うことができます。

現在 現代世界バクテリアの種類と属を決定するための加速された方法があります。 したがって、ロシアでは、彼らはインジケーターペーパーのシステムを使用しています-NIB、これは6〜12時間後に使用せずに許可します 多数純粋な細菌培養物を分離するための培地。 免疫蛍光法は、感染症の迅速な診断にも広く使用されています（血清学的研究を参照）。

26.細菌学的診断法 感染症.

細菌学的方法は、病原体（同じ種の細菌を含む集団）の純粋な培養物を分離することから成り、この病原体を特定することが細菌学的研究の主な方法です

特定の体系的なグループ（種、属）に属することを確立するための細菌学研究室での微生物の特性の研究は、それらの同定と呼ばれます。

一般に、細菌学的研究方法は、18〜24時間続く多段階の細菌学的研究です。

細菌学的方法では、嫌気性培養物を嫌気性菌に入れます。 バルーンから空気を取り除き、酸素を含まない混合ガスに置き換えます。

細菌学的方法の基本は、研究の最初の段階で行われる病原体の純粋な培養物の分離です。 病原体の純粋な培養物を分離するために、採取した材料に接種します。 播種は、原則として、疑わしい病原体の特性に基づいて選択された高密度栄養培地で行われます。

細菌学的方法では、可能であれば、特定の種類の細菌のみが増殖する培地を使用します。選択培地、または疑わしい病原体を他の微生物と区別できる培地、または鑑別診断培地です。

細菌学的方法では、栄養培地への材料の接種は、ガラスまたは金属のへらを使用するか、または試験材料に存在する細菌が栄養培地の表面に分散するように細菌ループを使用して実行されます。 そのような分散の結果として、各細菌細胞は環境のそれ自身の部分に入ります。

細菌学的研究の結果、少量の病原体の含有量が試験物質に予想される場合、その蓄積のために液体栄養培地に接種が行われ、いわゆる濃縮が行われます。この微生物に最適な培地。 次に、液体栄養培地からペトリ皿に注がれた固体培地への再播種が行われます。 病原体を接種した培地は、通常は特定の温度のサーモスタットに入れられます。これは、細菌学的方法にとって重要です。

細菌学的研究方法の第2段階では、高密度の栄養培地で増殖し、1つの細菌細​​胞に由来する細菌コロニーの研究が行われます。 （コロニーであり、病原体の純粋な培養物です）。 コロニーの顕微鏡的および巨視的検査は、反射光および透過光で実施されます。肉眼で、低倍率の顕微鏡下で、拡大鏡を使用します。

コロニーの文化的特性が注目されます：それらの形状、サイズ、色、エッジと表面の性質、構造、一貫性。 さらに、対象となる各コロニーの一部を使用して塗抹標本を作成します。 グラムスミアは顕微鏡で染色され、分離された培養物の着色（着色との関係）および形態学的特性を決定し、同時にその純度をチェックします。

コロニーの残りの部分は、より完全な研究のために純粋な培養物を蓄積するために、この種に最適な培地、例えば、傾斜寒天を試験管に接種されます。 チューブはサーモスタット内で18〜24時間移動します。 第二段階では、上記の研究に加えて、成長したコロニーの数がしばしば数えられます。

このような研究を行うために、採取した試験物質の連続希釈液を調製し、そこから栄養培地を含むカップに播種し、増殖したコロニーの数を数え、希釈液を掛けて、そこから微生物の含有量を計算します。材料で決定されます。

病原体の分離された純粋な培養物の同定、およびこの培養物に対する抗生物質および他の化学療法薬に対する感受性の決定は、細菌学的方法の第3段階です。 分離された細菌培養物は、着色、形態学的、生化学的、文化的、毒素産生性、抗原性によって識別されます。

最初のステップは、傾斜寒天上で増殖した培養物から塗抹標本を採取し、細菌の形態を調べ、増殖した細菌の培養物の純度を確認することです。 次に、分離された純粋な細菌培養物をヒス培地に接種します。 生化学的特性を決定するために他の培地に接種することが望ましい。

微生物の毒素形成は、invivoまたはinvitroでの抗毒素による毒素中和反応を使用して決定されます。 場合によっては、他の病原性因子も研究されます。 細菌学研究所で実施されている上記の研究により、病原体の属または種類を特定することができます。

ペーパーディスク法は、抗生物質を含浸させたディスク周辺の細菌増殖を阻害するゾーンの特定に基づいています。 連続希釈法を使用する場合は、化学製剤（液体栄養培地を含む抗生物質）を試験管で希釈した後、同数の細菌を試験管に接種します。 細菌の増殖の有無により、結果が記録されます。 菌株の同一性を決定するための細菌学的研究方法の結果として、得られた薬剤感受性は疫学的目的にも役立つ可能性があります。

材料の一部で病原体を検出できない可能性があるため、バクテリオキャリアを検出するときに繰り返し研究を行うことができます。

これは、感染症の検査室診断で使用される主な方法です。 細菌学的研究方法の本質は、患者からの病理学的物質の播種と病原体の純粋な培養物の分離、それに続く形態学的、文化的、着色的、生化学的および抗原的特徴によるその同定です。

純粋な培養物を分離する方法は、特定の種類の微生物を1つまたは別の自然の生息地から分離することを可能にします。 最も重要な方法微生物学的研究。 純粋な培養物を分離する方法を最初に提案したのはL.パスツールでした。

パスツール法は、液体栄養培地の使用に基づいており、主に1種類の微生物を含む材料（たとえば、敗血症の血液など）から純粋な培養物を確実に分離しました。 個々の種類の微生物をそれらの混合物から分離する必要がある場合、それはあまり効果的ではありませんでした。 一方、自然条件下では、細菌学的検査の材料（喀痰、膿、土壌、水など）には、ほとんどの場合、さまざまな微生物の混合物が含まれています。

1881年にこの目的で使用したRobertKoch（R。Koch）による純粋な培養物の分離方法の改善により、細菌混合物の分離と個々の種の分離研究の成功が可能になりました。 固形栄養培地播種中に、個々の微生物細胞が互いに分離されるように材料を分配することが可能です。 適切な条件下（栄養培地、最適温度）で、単離された細胞の繁殖は同じ種の子孫を与えます。 与えられた微生物種の純粋な培養.

一定期間後（ほとんどの場合1日）、孤立した細胞が見つかった高密度の栄養培地の場所で、増殖した微生物の集団が形成されます-いわゆる コロニー、肉眼で見ることができます。 それらは微生物の混沌とし​​た蓄積を表すものではありません。これは、多くの種類の微生物にとってコロニーが特徴的な構造を持っているという事実によってすでに判断できます。これにより、調査中の材料の植物相を大まかに決定し、それらを選択することができます。さらなる研究の対象となるコロニー。 適切な栄養培地にそのようなコロニーを再播種することは、純粋な培養物の分離です。

純粋な培養物の分離とその後の同定は、感染症の診断において最も重要であり、それらの迅速な認識、タイムリーな治療および予防を確実にします。 環境オブジェクト（空気、水、土壌など）の衛生状態と衛生状態の研究、および科学研究において、ミクロフローラを決定することはそれほど重要ではありません。

純粋な培養物を分離するための多くの方法が現在利用可能です。 それらのいくつかは限られた範囲で使用され、他は 幅広いアプリケーション。 最も一般的なのは、純粋な細菌培養物を分離するための以下に説明する方法です（Drigalskyの方法）。 他の微生物（スピロヘータ、原生動物）は、特別な分離方法を使用する必要があるか、人工栄養培地（一部の原生動物、リケッチア、ウイルス）ではまったく分離できません。

微生物混合物から純粋な培養物を分離する方法は、通常、2つの主要なグループに分けられます。栄養培地での微生物の機械的分離の原理に基づく方法と、微生物の生物学的特性の使用に基づく方法です。 最初のグループには、個々の細胞を分離する方法が含まれます。1）栄養培地の深さ。 2）媒体の表面上および3）目の制御下。 2番目のグループは、微生物の移動性、温度に対する態度、酸素、病原性などの微生物の特性を使用します。

播種および再播種技術

播種することによって微生物学の実践では、微生物を検出するための無菌栄養培地への試験物質の導入と呼ばれます。

再シード培養微生物の無菌環境への移動です。 微生物の培養と継代培養は、微生物学の実践において最も一般的な方法の1つです。

再播種は、異物が空気中や周囲の物体の表面から栄養培地に侵入しないように行われます。 このためには、厳守する必要があります 次のトリック:

1）作物は、火のついたバーナーのすぐ近くで作られ、その炎の中で、ループ、ピンセット、綿のプラグ、および試験管の端が滅菌されます。

2）で 左手継代培養した試験管の1つを取り、もう1つの試験管（滅菌栄養培地を使用）を親指と人差し指の間で傾斜した位置に保ちます。

3）ループはバーナーの炎の上で垂直位置に保持され、その金属部分は赤熱で煆焼され、次に水平に傾けられ、ループホルダーは滅菌されます。

4）綿栓を取り出し、右手の薬指と小指で押さえます。 テーブルや物にコルクを置くことはお勧めしません。

5）両方のチューブの端を燃やします。

6）壁に触れずに注意深く継代培養する培養物を試験管にループを導入し、固体培地上に液体の液滴または少量のプラークを捕捉し、壁に触れないようにして、2番目に移します枯渇した栄養培地を備えた試験管;

7）ループを外し、試験管の端とストッパーの内側の端を焼きます。 綿栓に火がついたら、それで試験管を閉じ、手またはピンセットで外端を消します。

8）ループが再び炎の中で発射され、適切な碑文が試験管に作成されます：文化の名前と播種の日付。

液体培地での播種パスツールまたは目盛り付きピペットで製造できます。 パスツールピペットを使用する場合は、焦げたピンセットを使用して密封された端を破り、ピペット全体を軽く燃やします。 培養物の入った試験管を左手に置き、右手に親指と中指の間にピペットを入れて持ちます。 トップホール人差し指。

試験管から綿栓を外した後、試験管の端を焼きます。 ピペットを慎重に試験管に下げ、人差し指を外します。 次に、人差し指でピペットの上部開口部を閉じ、試験管から取り外します。 綿栓と試験管の端は、閉じる前に焼成されます。 試験材料を液体媒体に移します。 接種後、ピペットは消毒液に入れられます。

固形培地への播種。斜め寒天に播種する場合は、直線またはジグザグのストロークが適用されます。 これを行うために、接種された材料を含むループが、凝縮水が底に蓄積するまで試験管に導入され、寒天を緩めることなく注意深くストロークが適用されます。 固体接種は、傾斜寒天の表面全体に接種物を塗ることによって得られます。

ペトリ皿の高密度培地で、以下のように接種を行う。 試験管内の栄養培地を沸騰水浴で溶かし、48〜50℃に冷却し、高さ3〜5mmの均一な層の滅菌カップに注ぎます。 固化した培地を密閉カップ内のサーモスタットで20〜30分間乾燥させます。 開いたカップは、滅菌紙で覆われたサーモスタットの棚に逆さまに置かれます。 ふたはカップの隣に置かれます。 乾燥中、凝縮水は栄養培地の表面とカップの内面から蒸発します。 播種は、平行ストロークの形のループまたはガラスヘラで行われます。

微生物の種類を決定するとき、そして嫌気性菌を成長させるために、それらは生成します 注射による播種寒天またはゼラチンのカラムで。 これを行うには、試験管を逆さまにし、培地のカラムを接種材料付きの長い真っ直ぐな針で上から下、そして一番下まで突き刺します。 次に、針を慎重に取り外し、焦げた綿のプラグで試験管を閉じます。 感染に対する特別な予防措置が必要な場合は、純粋な培養物を再播種するための特別なキャビネットで作物が実行されます。 接種したチューブとペトリ皿を成長インキュベーターに入れます。

栄養培地の内部またはその表面にある微生物および胞子は移動できませんが、凝固時の場所にとどまります。 各細胞または胞子は増殖し始め、2〜3日後に形成されます コロニー- 大量同じタイプのセル。 コロニーが単一の細胞から形成された場合、それはその細胞から増殖した微生物の純粋な培養物になります。

成長しているコロニーは、最初に肉眼で観察され、次に虫眼鏡または顕微鏡で観察されます。 同時に、コロニーの外観、色、構造などが異なることに気付かないことは不可能です。