जीवाणु अनुसंधान के तरीके। जीवाणु अनुसंधान की विधि

सांस्कृतिक (बैक्टीरियोलॉजिकल) अनुसंधान विधि - पोषक माध्यमों पर संवर्धन करके सूक्ष्मजीवों (बैक्टीरिया) की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने और पहचानने के उद्देश्य से विधियों का एक समूह।

एक शुद्ध संस्कृति एक ही प्रजाति के सूक्ष्मजीवों का एक संग्रह है। सबसे अधिक बार, एक अलग कॉलोनी (एकल माइक्रोबियल सेल की संतान) का चयन और खेती करके एक शुद्ध संस्कृति प्राप्त की जाती है।

विधि कदम:

1. अनुसंधान के लिए सामग्री का संग्रह।

2. शुद्ध संस्कृति का अलगाव और उसकी पहचान।

3. निष्कर्ष।

अनुसंधान के लिए सामग्री का संग्रह।अध्ययन की गई सामग्री का प्रकार अध्ययन के उद्देश्य पर निर्भर करता है (निदान - रोगी से; महामारी विज्ञान विश्लेषण - पर्यावरण, भोजन, रोगी और (या) जीवाणु वाहक से)।

शुद्ध संस्कृति का अलगाव. 3 या 4 चरण शामिल हैं:

1. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए घने पोषक माध्यम (अधिमानतः विभेदक निदान या चयनात्मक) के साथ एक कप पर सामग्री की बुवाई (प्रारंभिक माइक्रोस्कोपी के बाद)। यह सबसे अधिक बार यांत्रिक पृथक्करण की विधि द्वारा निर्मित होता है। कुछ मामलों में (उदाहरण के लिए, रक्त), सामग्री को एक तरल संवर्धन माध्यम में पूर्व-बीज किया जाता है, इसके बाद अगर माध्यम के साथ एक प्लेट पर उपसंस्कृति होती है। कभी-कभी टीकाकरण से पहले सामग्री का चयनात्मक उपचार किया जाता है (पृथक सूक्ष्मजीव के गुणों को ध्यान में रखते हुए, उदाहरण के लिए, प्रतिरोधी बैक्टीरिया को अलग करने के लिए एसिड या क्षार के साथ उपचार)। 18-24 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर खेती की जाती है। खेती का समय विभिन्न प्रकारबैक्टीरिया में उतार-चढ़ाव हो सकता है।

2(3): ए) अग्र प्लेट (सांस्कृतिक लक्षण) पर उपनिवेशों का अध्ययन, सबसे विशिष्ट लोगों का चयन; बी) इन कॉलोनियों से धुंधला हो जाना (ग्राम या अन्य विधियों के अनुसार) तैयार करना; ए) संचय माध्यम पर अध्ययन की गई शेष कॉलोनी की स्क्रीनिंग करना और इष्टतम तापमान पर थर्मोस्टैट में बढ़ना।

3(4). संचय माध्यम पर प्राप्त संस्कृति की शुद्धता का अध्ययन। इसके साथ ही

उद्देश्य एक धब्बा, दाग (आमतौर पर ग्राम के अनुसार) तैयार करना है, सूक्ष्म रूप से अध्ययन करना

रूपात्मक और टिंक्टोरियल समरूपता (विभिन्न क्षेत्रों में देखने के लिए)।

4(5)। शुद्ध संस्कृति की पहचान।

निष्कर्ष।संदर्भ (विशिष्ट) उपभेदों के गुणों की तुलना में विशेषताओं की समग्रता के अनुसार, सामग्री से पृथक सूक्ष्मजीव के प्रकार का संकेत दिया जाता है।

विधि मूल्यांकन:

लाभ:अपेक्षाकृत उच्च संवेदनशीलता और सटीकता, परीक्षण सामग्री में रोगाणुओं की संख्या निर्धारित करने की क्षमता, साथ ही एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति संवेदनशीलता; सीमाएं:सापेक्ष अवधि, विधि महंगी है।

21. एरोबेस और एनारोबेस के लिए पोषक माध्यम। पोषक मीडिया, वर्गीकरण के लिए आवश्यकताएँ।

आवश्यकताएं:

मीडिया पौष्टिक होना चाहिए

निश्चित ph . होना चाहिए

आइसोटोनिक होना चाहिए, अर्थात। माध्यम में आसमाटिक दबाव सेल के समान होना चाहिए।

नम होना चाहिए और बहुत बहना नहीं चाहिए

एक निश्चित रेडॉक्स क्षमता होनी चाहिए

बाँझ होना चाहिए

एकीकृत होना चाहिए, अर्थात्। व्यक्तिगत अवयवों की निरंतर मात्रा में होते हैं।

पोषक मीडिया को विभाजित किया जा सकता है:

ए) उत्पत्ति

1) प्राकृतिक - प्राकृतिक भोजन (मांस, दूध, आलू);

2) कृत्रिम - विशेष रूप से बढ़ते रोगाणुओं के लिए तैयार: - प्राकृतिक उत्पादों से मीडिया (मांस का पानी, मांस-पेप्टोन शोरबा (एमपीबी), मांस-पेप्टोन अगर (एमपीए), - एक निरंतर संरचना नहीं; - सिंथेटिक पोषक तत्व - सख्ती से समाधान आसुत जल में लवण, अमीनो एसिड, नाइट्रोजनस बेस, विटामिन की परिभाषित मात्रा - एक निरंतर संरचना होती है, टीकों, प्रतिरक्षा सीरा और एंटीबायोटिक दवाओं के उत्पादन में सूक्ष्मजीवों और सेल संस्कृतियों को विकसित करने के लिए उपयोग की जाती है;

बी) नियुक्ति के द्वारा:

1) सामान्य उद्देश्य (एमपीबी, एमपीए) - अधिकांश रोगाणु उन पर उगते हैं;

2) वैकल्पिक - मिश्रण से एक प्रकार के रोगाणुओं के विकास को चुनिंदा रूप से बढ़ावा देना (उदाहरण के लिए, स्टेफिलोकोसी के लिए जर्दी-नमक अगर);

3) डिफरेंशियल डायग्नोस्टिक - एक प्रकार के माइक्रोब को दूसरों से पर्यावरण की उपस्थिति से अलग करने की अनुमति दें (उदाहरण के लिए, एंडो, लेविन मीडिया रोगाणुओं के आंतों के समूह के लिए)।

इसके अलावा, पर निर्भर करता है उपयोग के उद्देश्यशुद्ध संस्कृतियों को अलग करने की योजना में, निम्नलिखित मीडिया को उद्देश्य से प्रतिष्ठित किया जा सकता है:

1) संवर्धन - रोगज़नक़ से जुड़े रोगाणुओं के विकास को रोकना;

2) पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए;

3) शुद्ध संस्कृति का संचय;

बी) संगति:

1) तरल;

2) अर्ध-तरल (0.5-0.7% की एकाग्रता में अगर-अगर के अलावा);

3) घना - 1% से ऊपर।

बैक्टीरियोलॉजिकल विधिरोगज़नक़ (एक ही प्रजाति के बैक्टीरिया युक्त आबादी) की एक शुद्ध संस्कृति को अलग करना और इस रोगज़नक़ की पहचान करना बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान की मुख्य विधि है

एक विशेष व्यवस्थित समूह (प्रजाति, जीनस) से संबंधित स्थापित करने के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल प्रयोगशाला में सूक्ष्मजीवों के गुणों के अध्ययन को उनकी पहचान कहा जाता है।

सामान्य तौर पर, अनुसंधान की बैक्टीरियोलॉजिकल विधि एक बहु-चरण बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन है, जो 18-24 घंटे तक रहता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि - यह कैसे किया जाता है?

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि में, अवायवीय संस्कृतियों को अवायवीय अवस्था में रखा जाता है। गुब्बारे से हवा निकाल दी जाती है और उसे गैस के मिश्रण से बदल दिया जाता है जिसमें ऑक्सीजन नहीं होता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का आधार रोगज़नक़ की शुद्ध संस्कृति का अलगाव है, जो अध्ययन के पहले चरण में होता है। रोगज़नक़ की एक शुद्ध संस्कृति को अलग करने के लिए, ली गई सामग्री को टीका लगाया जाता है। बुवाई, एक नियम के रूप में, घने पोषक माध्यम पर की जाती है, जिसे कथित रोगज़नक़ के गुणों के आधार पर चुना जाता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि में, यदि संभव हो तो, मीडिया का उपयोग किया जाता है, जिस पर केवल एक विशिष्ट प्रकार के बैक्टीरिया बढ़ते हैं - वैकल्पिक मीडिया, या मीडिया जो अन्य सूक्ष्मजीवों से कथित रोगज़नक़ को अलग करना संभव बनाता है, या अन्यथा विभेदक नैदानिक ​​​​मीडिया।

उदाहरण के लिए, बैक्टीरियोलॉजिकल निदान में आंतों में संक्रमण- एंडो माध्यम, टेल्यूराइट मीडिया का उपयोग डिप्थीरिया बेसिलस आदि को अलग करने के लिए किया जाता है। जब अवसरवादी सूक्ष्मजीवों को बैक्टीरियोलॉजिकल विधि से अलग किया जाता है, तो ली गई सामग्री की बुवाई सार्वभौमिक पोषक मीडिया पर की जाती है। ऐसे माध्यम का एक उदाहरण रक्त अगर है।

जीवाणु संस्कृतियों के अलगाव से जुड़े सभी जोड़तोड़ बर्नर की लौ पर किए जाते हैं।

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि के साथ, पोषक तत्व मीडिया पर सामग्री का टीकाकरण या तो एक गिलास या धातु के रंग के साथ या एक जीवाणु लूप के साथ किया जाता है ताकि परीक्षण सामग्री में मौजूद बैक्टीरिया पोषक माध्यम की सतह पर फैल जाए। इस तरह के फैलाव के परिणामस्वरूप, प्रत्येक जीवाणु कोशिका पर्यावरण के अपने हिस्से में प्रवेश करती है।

एक रोगज़नक़ की एक शुद्ध संस्कृति को एक रोग संबंधी सामग्री से अलग करते समय, जो कि विदेशी माइक्रोफ्लोरा से काफी दूषित है, एक शुद्ध संस्कृति को अलग करने के लिए अक्सर एक जैविक विधि का उपयोग किया जाता है। यह निम्नानुसार किया जाता है: वे परीक्षण सामग्री के साथ रोगज़नक़ के प्रति संवेदनशील प्रयोगशाला जानवरों को संक्रमित करते हैं। एक और उदाहरण जैविक विधि- थूक में न्यूमोकोकी की सामग्री के लिए एक रोगी की जांच करते समय, सामग्री को सफेद चूहों को अंतर्गर्भाशयी रूप से प्रशासित किया जाता है। 4-6 घंटे के बाद उनके रक्त से न्यूमोकोकस की शुद्ध संस्कृति प्राप्त होती है।

इस घटना में कि अनुसंधान की बैक्टीरियोलॉजिकल पद्धति के परिणामस्वरूप, परीक्षण सामग्री में रोगज़नक़ की एक छोटी मात्रा की सामग्री की उम्मीद की जाती है, इसके संचय के लिए एक तरल पोषक माध्यम पर टीकाकरण किया जाता है, तथाकथित संवर्धन माध्यम, जो इस सूक्ष्मजीव के लिए इष्टतम है। इसके बाद, पेट्री डिश में डाले गए तरल पोषक माध्यम से ठोस माध्यम में फिर से बुवाई की जाती है। रोगज़नक़ से संक्रमित माध्यम को थर्मोस्टैट में रखा जाता है, आमतौर पर एक निश्चित तापमान पर, जो बैक्टीरियोलॉजिकल विधि के लिए महत्वपूर्ण है।

बैक्टीरियोलॉजिकल रिसर्च विधि के दूसरे चरण में, एक घने पोषक माध्यम पर विकसित और एक जीवाणु कोशिका से उत्पन्न होने वाली जीवाणु कॉलोनियों का अध्ययन किया जाता है। (कॉलोनी और रोगज़नक़ों की एक शुद्ध संस्कृति है)। कालोनियों की सूक्ष्म और स्थूल परीक्षा परावर्तित और संचरित प्रकाश में की जाती है: नग्न आंखों के साथ, कम आवर्धन माइक्रोस्कोप के तहत, एक आवर्धक कांच के साथ।

उपनिवेशों के सांस्कृतिक गुणों को नोट किया जाता है: उनका आकार, आकार, रंग, किनारों की प्रकृति और सतह, संरचना, स्थिरता। इसके अलावा, लक्षित कॉलोनियों में से प्रत्येक का एक हिस्सा स्मीयर तैयार करने के लिए उपयोग किया जाता है। ग्राम स्मीयर दागदार होते हैं, सूक्ष्म रूप से, पृथक संस्कृति के टिंक्टोरियल (रंग से संबंध) और रूपात्मक गुणों का निर्धारण करते हैं और साथ ही इसकी शुद्धता की जांच करते हैं।

कॉलोनी के बाकी हिस्सों को इस प्रजाति के लिए इष्टतम माध्यम के साथ टेस्ट ट्यूब में टीका लगाया जाता है, उदाहरण के लिए, तिरछा अगर, एक अधिक संपूर्ण अध्ययन के लिए एक शुद्ध संस्कृति को जमा करने के लिए। थर्मोस्टेट में ट्यूबों को 18-24 घंटों के लिए स्थानांतरित किया जाता है। दूसरे चरण में, उपरोक्त अध्ययनों के अलावा, अक्सर विकसित कॉलोनियों की संख्या की गणना की जाती है।

अवसरवादी रोगजनकों के कारण होने वाली बीमारियों में इसका विशेष महत्व है। ऐसी बीमारियों में, किसी भी रोगज़नक़ की अग्रणी भूमिका का न्याय केवल रोग संबंधी सामग्री में पर्याप्त मात्रा में इसकी सामग्री से करने की अनुमति है। बड़ी संख्या मेंऔर अन्य वनस्पतियों पर इस रोगज़नक़ की प्रबलता।

इस तरह के एक अध्ययन का संचालन करने के लिए, ली गई परीक्षण सामग्री के क्रमिक कमजोर पड़ने को तैयार किया जाता है, जिसमें से एक पोषक माध्यम के साथ कप पर बोया जाता है, उगाई गई कॉलोनियों की संख्या को कमजोर पड़ने से गुणा किया जाता है, जिसमें से सूक्ष्मजीवों की सामग्री होती है। सामग्री में निर्धारित है।

रोगज़नक़ की पृथक शुद्ध संस्कृति की पहचान और इस संस्कृति के लिए एंटीबायोटिक दवाओं और अन्य कीमोथेराप्यूटिक दवाओं के प्रति संवेदनशीलता का निर्धारण बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का तीसरा चरण है। पृथक जीवाणु संस्कृति की पहचान टिंक्टोरियल, रूपात्मक, जैव रासायनिक, सांस्कृतिक, विषाक्त, प्रतिजनी गुणों द्वारा की जाती है।

पहला कदम तिरछी अगर पर उगाई गई संस्कृति से एक धब्बा लेना है, बैक्टीरिया की आकृति विज्ञान की जांच करना और विकसित बैक्टीरिया की संस्कृति की शुद्धता की जांच करना है। इसके बाद, बैक्टीरिया की पृथक शुद्ध संस्कृति को हिस मीडिया पर टीका लगाया जाता है। जैव रासायनिक गुणों को निर्धारित करने के लिए अन्य मीडिया पर टीका लगाना वांछनीय है।

एंजाइमेटिक, या जैव रासायनिक, बैक्टीरिया के गुण एंजाइमों के कारण होते हैं जो प्रोटीन, कार्बोहाइड्रेट के टूटने में शामिल होते हैं, जिससे विभिन्न सब्सट्रेट की कमी और ऑक्सीकरण होता है।

इसके अलावा, प्रत्येक प्रकार के बैक्टीरिया इसके लिए एंजाइमों का एक निरंतर सेट पैदा करते हैं। सबसे अधिक बार, एंटीजेनिक गुणों का अध्ययन करते समय, कांच पर एक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है।

रोगाणुओं के विष निर्माण का निर्धारण विवो या इन विट्रो में एंटीटॉक्सिन के साथ टॉक्सिन न्यूट्रलाइजेशन रिएक्शन का उपयोग करके किया जाता है। कुछ मामलों में, अन्य विषाणु कारकों का भी अध्ययन किया जाता है। उपरोक्त अध्ययन, जो एक बैक्टीरियोलॉजिकल प्रयोगशाला में किए जाते हैं, हमें जीनस या रोगज़नक़ के प्रकार को निर्धारित करने की अनुमति देते हैं।

संक्रमण के स्रोत का पता लगाने सहित, रोग की महामारी श्रृंखला की पहचान करने के लिए, बैक्टीरिया की अंतर-विशिष्ट पहचान की जाती है। बैक्टीरिया की अंतःविशिष्ट पहचान का सार फागोवर या फागोटाइप का निर्धारण करना है, अध्ययन विभिन्न गुणपृथक एंटीजेनिक बैक्टीरिया। फेज के प्रकार को निर्धारित करने की प्रक्रिया को फेज टाइपिंग कहा जाता है। टाइफाइड बुखार में फेज टाइपिंग की जाती है, स्टैफ संक्रमण, पैराटाइफ बी.

एक पोषक माध्यम के साथ एक कप पर, जिसे एक स्पैटुला पृथक शुद्ध संस्कृति के साथ बीज दिया जाता है, विभिन्न नैदानिक ​​​​चरणों को बूंद-बूंद करके लागू करें। यदि संस्कृति इस चरण के प्रति संवेदनशील है, तो बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के परिणामस्वरूप, तथाकथित नकारात्मक कॉलोनियां (सजीले टुकड़े) देखी जाती हैं, जो नष्ट बैक्टीरिया के गोलाकार क्षेत्रों के गठन की तरह दिखती हैं। रोगज़नक़ संस्कृति कई या एक चरण के प्रति संवेदनशील हो सकती है।

बैक्टीरिया के दवा-प्रतिरोधी रूपों के व्यापक प्रसार के कारण, तर्कसंगत कीमोथेरेपी की नियुक्ति के लिए, रोगज़नक़ की पृथक शुद्ध संस्कृति के कीमोथेराप्यूटिक दवाओं के लिए एंटीबायोग्राम - प्रतिरोध या संवेदनशीलता का निर्धारण करना आवश्यक है। एंटीबायोग्राम के लिए या तो पेपर डिस्क विधि या सबसे सटीक लेकिन बोझिल सीरियल कमजोर पड़ने की विधि का उपयोग किया जाता है।

पेपर डिस्क विधि एंटीबायोटिक दवाओं के साथ गर्भवती डिस्क के आसपास बैक्टीरिया के विकास के निषेध के क्षेत्र की पहचान पर आधारित है। धारावाहिक तनुकरण की विधि का उपयोग करने के मामले में, एक रासायनिक तैयारी - एक तरल पोषक माध्यम के साथ एक एंटीबायोटिक को टेस्ट ट्यूब में पतला किया जाता है, जिसके बाद टेस्ट ट्यूब में समान संख्या में बैक्टीरिया को टीका लगाया जाता है। जीवाणु वृद्धि की अनुपस्थिति या उपस्थिति से, परिणाम दर्ज किए जाते हैं। उपभेदों की पहचान निर्धारित करने के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल शोध पद्धति के परिणामस्वरूप, परिणामी एंटीबायोग्राम भी महामारी विज्ञान के उद्देश्यों की पूर्ति कर सकता है।

बैक्टीरियोकैरियर का पता लगाने पर बार-बार अध्ययन किया जा सकता है, क्योंकि सामग्री के एक हिस्से में रोगज़नक़ का पता लगाना संभव नहीं है।

वर्तमान में आधुनिक दुनियाबैक्टीरिया के प्रकार और जीनस को निर्धारित करने के लिए त्वरित तरीके हैं। इसलिए, रूस में वे संकेतक पत्रों की एक प्रणाली का उपयोग करते हैं - एनआईबी, जो 6-12 घंटों के बाद और उपयोग किए बिना अनुमति देता है एक बड़ी संख्या मेंएक शुद्ध जीवाणु संस्कृति को अलग करने के लिए संस्कृति मीडिया। संक्रामक रोगों के तेजी से निदान के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंट विधि का भी व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है (सीरोलॉजिकल अध्ययन देखें)।

बैक्टीरियोलॉजिकल रिसर्च मेथड (बीएलएमआई)- पोषक मीडिया पर खेती द्वारा बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों के अलगाव और सूक्ष्मजीवों की रूपात्मक, सांस्कृतिक, जैव रासायनिक, आनुवंशिक, सीरोलॉजिकल, जैविक, पारिस्थितिक विशेषताओं के अध्ययन के आधार पर प्रजातियों के लिए उनकी पहचान पर आधारित एक विधि।

स्वास्थ्य मंत्रालय द्वारा अनुमोदित मानक नैदानिक ​​​​योजनाओं का उपयोग करके संक्रमण का जीवाणु निदान किया जाता है।

शुद्ध संस्कृति -एक ही प्रजाति के जीवाणु, पोषक माध्यम पर उगाए जाते हैं, जिनके गुणों का अध्ययन किया जा रहा है।

तनाव- एक विशिष्ट स्रोत से पृथक एक ही प्रजाति के सूक्ष्मजीवों की पहचान की गई शुद्ध संस्कृति कुछ समय. एक ही प्रजाति के उपभेद जैव रासायनिक, आनुवंशिक, सीरोलॉजिकल, जैविक और अन्य गुणों के साथ-साथ अलगाव के स्थान और समय में बहुत भिन्न हो सकते हैं।

बीएलएमआई के लक्ष्य:

1. एटियलॉजिकल निदान: सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृति का अलगाव और इसकी पहचान।

2. परिभाषा अतिरिक्त गुण, उदाहरण के लिए, एंटीबायोटिक दवाओं और बैक्टीरियोफेज के लिए सूक्ष्मजीव की संवेदनशीलता।

3. सूक्ष्मजीवों की संख्या का निर्धारण (यूपीएम के कारण होने वाले संक्रमणों के निदान में महत्वपूर्ण)।

4. सूक्ष्मजीवों की टाइपिंग, यानी अध्ययन के आधार पर अंतर-विशिष्ट अंतरों का निर्धारण जेनेटिकतथा महामारी विज्ञान(फागोवर और सेरोवर) मार्करइसका उपयोग महामारी विज्ञान के उद्देश्यों के लिए किया जाता है, क्योंकि यह आपको विभिन्न अस्पतालों, भौगोलिक क्षेत्रों में विभिन्न रोगियों और बाहरी वातावरण की विभिन्न वस्तुओं से पृथक सूक्ष्मजीवों की समानता स्थापित करने की अनुमति देता है।

BLMI में कई चरण शामिल हैं,ऐरोबेस, ऐच्छिक अवायवीय तथा बाध्यकारी अवायवीय जीवों के लिए भिन्न।

I. एरोबिक्स और वैकल्पिक अवायवीय जीवों की शुद्ध संस्कृति के अलगाव में BLMI के चरण।

मंच।

ए सामग्री का संग्रह, परिवहन, भंडारण, पूर्व उपचार।कभी-कभी, बुवाई से पहले, पृथक सूक्ष्मजीव के गुणों को ध्यान में रखते हुए, सामग्री का चयनात्मक प्रसंस्करण किया जाता है। उदाहरण के लिए, एसिड प्रतिरोधी माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस की उपस्थिति के लिए थूक या अन्य सामग्री की जांच करने से पहले, सामग्री को एसिड या क्षार समाधान के साथ इलाज किया जाता है।

बी. संवर्धन माध्यम में सीडिंग(यदि आवश्यक हो) यह किया जाता है यदि परीक्षण सामग्री में बैक्टीरिया की एक छोटी मात्रा होती है, उदाहरण के लिए, रक्त संस्कृति को अलग करते समय। ऐसा करने के लिए, बड़ी मात्रा में बुखार की ऊंचाई पर लिया गया रक्त (वयस्कों में 8-10 मिली, बच्चों में 4-5 मिली) को 1:10 के अनुपात में माध्यम में टीका लगाया जाता है (रक्त जीवाणुनाशक की कार्रवाई को दूर करने के लिए) कारक); बुवाई 18-24 घंटों के लिए 37 0 C के तापमान पर की जाती है।

बी परीक्षण सामग्री की माइक्रोस्कोपी।परीक्षण सामग्री से एक स्मीयर तैयार किया जाता है, जिसे ग्राम या अन्य विधि से दाग दिया जाता है और सूक्ष्मदर्शी किया जाता है। वर्तमान माइक्रोफ्लोरा, इसकी मात्रा का आकलन करें। आगे के शोध के दौरान प्राथमिक स्मीयर में मौजूद सूक्ष्मजीवों को अलग किया जाना चाहिए।

छ. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए पोषक माध्यमों पर बुवाई।सामग्री को अलग-अलग कॉलोनियों को प्राप्त करने के लिए एक विभेदक निदान या चयनात्मक माध्यम के साथ एक प्लेट पर यांत्रिक पृथक्करण द्वारा लूप या स्पैटुला के साथ टीका लगाया जाता है। बुवाई के बाद, डिश को उल्टा कर दिया जाता है (संक्षेपण तरल की बूंदों के साथ कालोनियों को धब्बा से बचने के लिए), हस्ताक्षरित और थर्मोस्टेट में 37 0 सी के तापमान पर 18-24 घंटों के लिए रखा जाता है।

यह याद रखना चाहिए कि सूक्ष्मजैविक संस्कृतियों की बुवाई और पुनर्रोपण करते समय, कार्यकर्ता का ध्यान पोषक माध्यमों के संदूषण को रोकने और दूसरों के संक्रमण और आत्म-संक्रमण को रोकने के लिए सड़न रोकनेवाला नियमों के अनुपालन की ओर आकर्षित किया जाना चाहिए!

अवसरवादी सूक्ष्मजीवों के कारण होने वाले संक्रमण के मामले में, जहां रोग संबंधी सामग्री में मौजूद सूक्ष्मजीवों की संख्या मायने रखती है, सामग्री का एक मात्रात्मक टीकाकरण किया जाता है, जिसके लिए सामग्री के 100 गुना कमजोर पड़ने (आमतौर पर 3 कमजोर पड़ने) की एक श्रृंखला तैयार की जाती है। टेस्ट ट्यूब में एक बाँझ आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में। उसके बाद, पेट्री डिश में पोषक तत्व मीडिया पर प्रत्येक कमजोर पड़ने के 50 μl बोया जाता है।

मंच।

A. मीडिया पर कॉलोनी के आकारिकी का अध्ययन, उनकी माइक्रोस्कोपी।वे व्यंजनों को देखते हैं और इष्टतम पोषक माध्यम, विकास दर और सूक्ष्मजीवों के विकास की प्रकृति पर ध्यान देते हैं। अध्ययन करने के लिए चुनें केंद्र के करीब, स्ट्रोक के साथ स्थित पृथक कॉलोनियां।यदि कई प्रकार की कॉलोनियां बढ़ती हैं, तो प्रत्येक की अलग से जांच की जाती है। कालोनियों के संकेतों का आकलन करें (तालिका। 7)। यदि आवश्यक हो, फसलों के साथ व्यंजन एक आवर्धक कांच के माध्यम से या कम आवर्धन लेंस और एक संकुचित एपर्चर के साथ एक माइक्रोस्कोप का उपयोग करके देखा जाता है। वे कालोनियों के विभिन्न रूपों के टिंकटोरियल गुणों का अध्ययन करते हैं, इसके लिए अध्ययन के तहत कॉलोनी का एक हिस्सा तैयार किया जाता है। धब्बा,ग्राम या अन्य विधियों से सना हुआ, सूक्ष्म रूप से और संस्कृति की शुद्धता की आकृति विज्ञान का निर्धारण। यदि आवश्यक हो, तो डालें कांच पर सांकेतिक आरएपॉलीवलेंट सीरम के साथ।

बी शुद्ध संस्कृति का संचय।एक शुद्ध संस्कृति को संचित करने के लिए, सभी आकारिकी की अलग-अलग कॉलोनियों को तिरछी अगर या किसी अन्य पोषक माध्यम के साथ अलग-अलग टेस्ट ट्यूब में उपसंस्कृत किया जाता है और +37 0 C पर थर्मोस्टैट में इनक्यूबेट किया जाता है (यह तापमान अधिकांश सूक्ष्मजीवों के लिए इष्टतम है, लेकिन यह अलग हो सकता है, उदाहरण के लिए, के लिए कैम्पिलोबैक्टीरियम एसपीपी।- +42 0 सी, कैंडिडा एसपीपी। तथा येर्सिनिया पेस्टिस - +25 0 सी)।

क्लिगलर का माध्यम आमतौर पर एंटरोबैक्टीरिया के संचय माध्यम के रूप में उपयोग किया जाता है।

क्लिगलर माध्यम की संरचना:एमपीए, 0.1% ग्लूकोज, 1% लैक्टोज, हाइड्रोजन सल्फाइड अभिकर्मक (आयरन सल्फेट + सोडियम थायोसल्फेट + सोडियम सल्फाइट), फिनोल रेड इंडिकेटर। माध्यम का प्रारंभिक रंग रास्पबेरी-लाल है, माध्यम टेस्ट ट्यूबों में "तिरछा" है: इसमें एक कॉलम (2/3) और एक बेवल सतह (1/3) है।

क्लिगलर माध्यम में बुवाई सतह पर एक स्ट्रोक और एक स्तंभ में एक इंजेक्शन द्वारा की जाती है।

मंच।

ए. संचय माध्यम पर विकास के लिए लेखांकन, संस्कृति की शुद्धता का आकलनएक ग्राम स्मीयर में। विकास पैटर्नपृथक शुद्ध संस्कृति। दृष्टि से स्वच्छ संस्कृति एक समान वृद्धि की विशेषता है। पर सूक्ष्मदर्शी द्वारा परीक्षणइस तरह की संस्कृति से तैयार एक सना हुआ धब्बा, रूपात्मक और टिंकटोरियल रूप से सजातीय कोशिकाओं को देखने के विभिन्न क्षेत्रों में पाया जाता है। हालांकि, कुछ प्रकार के जीवाणुओं में निहित स्पष्ट फुफ्फुसीयता के मामले में, शुद्ध संस्कृति से स्मीयर में विभिन्न आकारिकी वाली कोशिकाएं एक साथ हो सकती हैं।

यदि Kligler संकेतक माध्यम का उपयोग संचय माध्यम के रूप में किया जाता है, तो कॉलम और बेवल वाले भाग में इसके रंग में परिवर्तन का मूल्यांकन किया जाता है, जिसके अनुसार जैव रासायनिक गुण निर्धारित किए जाते हैं: ग्लूकोज, लैक्टोज का किण्वन और हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन। जब लैक्टोज विघटित होता है, तो माध्यम का ढलान वाला हिस्सा पीला हो जाता है; जब ग्लूकोज विघटित होता है, तो स्तंभ पीला हो जाता है। शर्करा के अपघटन के दौरान CO2 के निर्माण के साथ, गैस के बुलबुले या स्तंभ में एक विराम बनता है। हाइड्रोजन सल्फाइड उत्पादन के मामले में, फेरस सल्फेट को फेरस सल्फाइड में बदलने के कारण इंजेक्शन के साथ कालापन देखा जाता है।

Kligler माध्यम (चित्र 23) के रंग में परिवर्तन की प्रकृति को सूक्ष्मजीवों द्वारा नाइट्रोजनयुक्त पदार्थों के टूटने की असमान तीव्रता और एरोबिक (ढलान सतह पर) और अवायवीय (एक में) के तहत क्षारीय उत्पादों के गठन द्वारा समझाया गया है। कॉलम) शर्तें।

एरोबिक स्थितियों के तहत, एक मध्यम स्तंभ की तुलना में ढलान वाली सतह पर अधिक तीव्र क्षार निर्माण होता है। इसलिए, माध्यम में मौजूद ग्लूकोज के कम मात्रा में अपघटन के दौरान, बेवल वाली सतह पर बनने वाला एसिड जल्दी से बेअसर हो जाता है। वहीं, लैक्टोज के अपघटन के दौरान, जो उच्च सांद्रता में एक माध्यम में मौजूद होता है, क्षारीय उत्पाद एसिड को बेअसर करने में सक्षम नहीं होते हैं।

स्तंभ में अवायवीय स्थितियों के तहत, क्षारीय उत्पाद नगण्य मात्रा में बनते हैं, इसलिए यहां ग्लूकोज किण्वन का पता लगाया जाता है।

चावल। 23.क्लिगलर संकेतक माध्यम:

1 - प्रारंभिक,

2 - वृद्धि के साथ ई कोलाई

3- वृद्धि के साथ एस. पैराटाइफी बी,

4 - वृद्धि के साथ एस टाइफीस

ई कोलाईग्लूकोज और लैक्टोज को गैस बनाने के साथ विघटित करें, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन न करें। वे मीडिया ब्रेक के साथ कॉलम और बेवल वाले हिस्से के पीलेपन का कारण बनते हैं।

एस. पैराटाइफीगैस निर्माण के साथ ग्लूकोज को विघटित करें, लैक्टोज-नकारात्मक। वे टूटने के साथ स्तंभ के पीलेपन का कारण बनते हैं, बेवल वाला हिस्सा रंग नहीं बदलता है और रास्पबेरी रहता है। जिसमें एस. पैराटाइफी बीहाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन (इंजेक्शन के दौरान एक काला रंग दिखाई देता है), एस. पैराटाइफी एहाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन नहीं होता है।

एस टाइफीसगैस के गठन के बिना ग्लूकोज को विघटित करें, लैक्टोज-नकारात्मक, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन करें। वे स्तंभ को बिना टूटे पीले होने का कारण बनते हैं, बेवल वाला हिस्सा रंग नहीं बदलता है और रास्पबेरी रहता है, इंजेक्शन के दौरान काला रंग दिखाई देता है।

शिगेला एसपीपी।ग्लूकोज-पॉजिटिव, लैक्टोज-नेगेटिव, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन नहीं करते हैं। वे स्तंभ के पीलेपन का कारण बनते हैं (सेरोवर के आधार पर ब्रेक के साथ या बिना), बेवल वाला हिस्सा रंग नहीं बदलता है और लाल रंग का रहता है।

बी शुद्ध संस्कृति की अंतिम पहचान(प्रजातियों या प्रकार के स्तर तक पृथक सूक्ष्मजीव की व्यवस्थित स्थिति का निर्धारण) और एंटीबायोटिक दवाओं के लिए पृथक संस्कृति के संवेदनशीलता स्पेक्ट्रम का निर्धारण।

इस स्तर पर एक शुद्ध संस्कृति की पहचान करने के लिए, जैव रासायनिक, आनुवंशिक, सीरोलॉजिकल और जैविक विशेषताओं का अध्ययन किया जाता है (तालिका 8)।

नियमित प्रयोगशाला अभ्यास में, पहचान के दौरान सभी गुणों का अध्ययन करने की आवश्यकता नहीं होती है। सूचनात्मक, सुलभ, सरल परीक्षण, पृथक सूक्ष्मजीव की प्रजातियों (संस्करण) संबद्धता को निर्धारित करने के लिए पर्याप्त है।

यह प्रयोगशाला निदान में उपयोग की जाने वाली मुख्य विधि है। संक्रामक रोग. बैक्टीरियोलॉजिकल शोध पद्धति का सार रोगियों से पैथोलॉजिकल सामग्री की बुवाई और रोगज़नक़ की शुद्ध संस्कृति का अलगाव है, इसके बाद रूपात्मक, सांस्कृतिक, टिंक्टोरियल, जैव रासायनिक और एंटीजेनिक विशेषताओं द्वारा इसकी पहचान की जाती है।

शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने की विधि, जो कुछ प्रकार के रोगाणुओं को एक या दूसरे प्राकृतिक आवास से अलग करने की अनुमति देती है, है सबसे महत्वपूर्ण तरीकासूक्ष्मजीवविज्ञानी अनुसंधान। एक शुद्ध संस्कृति को अलग करने के लिए एक विधि का प्रस्ताव करने वाले पहले व्यक्ति एल पाश्चर थे।

पाश्चर विधि, तरल पोषक माध्यम के उपयोग पर आधारित, मुख्य रूप से एक प्रकार के सूक्ष्म जीव (उदाहरण के लिए, सेप्टिसीमिया में रक्त से, आदि) वाली सामग्री से शुद्ध संस्कृति के अलगाव को सुनिश्चित करती है। यह उन मामलों में कम प्रभावी था जहां कुछ प्रकार के सूक्ष्मजीवों को उनके मिश्रण से अलग करना आवश्यक था। इस बीच, प्राकृतिक परिस्थितियों में, बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा (थूक, मवाद, मिट्टी, पानी, आदि) के लिए सामग्री में अक्सर विभिन्न सूक्ष्मजीवों का मिश्रण होता है।

1881 में इस उद्देश्य के लिए इस्तेमाल किए जाने वाले रॉबर्ट कोच (आर। कोच) द्वारा शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने की विधि में सुधार के कारण बैक्टीरिया के मिश्रण का सफल अलगाव और अलग-अलग प्रजातियों का पृथक अध्ययन संभव हो गया। ठोस पोषक माध्यमजिस पर बुवाई के दौरान सामग्री को इस तरह से वितरित करना संभव है कि अलग-अलग माइक्रोबियल कोशिकाएं एक दूसरे से अलग हो जाएं। उपयुक्त परिस्थितियों (पोषक माध्यम, इष्टतम तापमान) के तहत, पृथक कोशिकाओं के प्रजनन से एक ही प्रजाति की संतान होती है, अर्थात। किसी दी गई माइक्रोबियल प्रजाति की शुद्ध संस्कृति.

एक निश्चित अवधि के बाद (अक्सर एक दिन में), घने पोषक माध्यम के उन स्थानों पर जहां पृथक कोशिकाएं पाई जाती हैं, गुणा रोगाणुओं की आबादी बनती है - तथाकथित कॉलोनी,नग्न आंखों के लिए दृश्यमान। वे रोगाणुओं के एक अराजक संचय का प्रतिनिधित्व नहीं करते हैं, जिसे पहले से ही इस तथ्य से आंका जा सकता है कि कई प्रकार के रोगाणुओं के लिए कालोनियों में एक विशिष्ट संरचना होती है, जिसके कारण अध्ययन के तहत सामग्री के वनस्पतियों को मोटे तौर पर निर्धारित करना और उनका चयन करना संभव है। कॉलोनियां जो आगे के अध्ययन के अधीन हैं। ऐसी कॉलोनियों को एक उपयुक्त पोषक माध्यम पर फिर से बोना एक शुद्ध संस्कृति का अलगाव है।

संक्रामक रोगों के निदान, उनकी तेजी से पहचान, समय पर उपचार और रोकथाम सुनिश्चित करने के लिए शुद्ध संस्कृतियों को उनकी बाद की पहचान के साथ अलग करना सबसे महत्वपूर्ण है। पर्यावरणीय वस्तुओं (वायु, पानी, मिट्टी, आदि) की स्वच्छता और स्वच्छ स्थिति के अध्ययन के साथ-साथ वैज्ञानिक अनुसंधान में भी माइक्रोफ्लोरा का निर्धारण करना कम महत्वपूर्ण नहीं है।

शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के कई तरीके अब उपलब्ध हैं। उनमें से कुछ का उपयोग सीमित सीमा तक किया जाता है, अन्य हैं विस्तृत आवेदन. शुद्ध जीवाणु संस्कृतियों (ड्रिगल्स्की की विधि) को अलग करने के लिए सबसे सार्वभौमिक नीचे वर्णित विधियां हैं। जबकि अन्य सूक्ष्मजीवों - स्पाइरोकेट्स, प्रोटोजोआ - को अलगाव के विशेष तरीकों के उपयोग की आवश्यकता होती है या कृत्रिम पोषक माध्यम (कुछ प्रोटोजोआ, रिकेट्सिया, वायरस) पर बिल्कुल भी अलग नहीं किया जा सकता है।

माइक्रोबियल मिश्रण से शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के तरीके आमतौर पर दो मुख्य समूहों में विभाजित होते हैं: एक पोषक माध्यम में रोगाणुओं के यांत्रिक पृथक्करण के सिद्धांत पर आधारित तरीके, और रोगाणुओं के जैविक गुणों के उपयोग के आधार पर विधियां। पहले समूह में व्यक्तिगत कोशिकाओं को अलग करने के तरीके शामिल हैं: 1) पोषक माध्यम की गहराई में; 2) माध्यम की सतह पर और 3) आँख के नियंत्रण में। दूसरा समूह रोगाणुओं के ऐसे गुणों का उपयोग उनकी गतिशीलता, तापमान के प्रति दृष्टिकोण, ऑक्सीजन और उनके रोगजनक गुणों के रूप में करता है।

बीज बोने और बोने की तकनीक

बुवाई सेसूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में, इसे सूक्ष्मजीवों का पता लगाने के लिए एक बाँझ पोषक माध्यम में कुछ परीक्षण सामग्री की शुरूआत कहा जाता है।

पुन: सीडिंगसुसंस्कृत सूक्ष्मजीवों का एक बाँझ वातावरण में स्थानांतरण है। सूक्ष्मजीवों की संस्कृति और उपसंस्कृति सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में सबसे आम तरीकों में से एक है।

पुन: सीडिंग इस तरह से की जाती है कि विदेशी सूक्ष्मजीव हवा से या आसपास की वस्तुओं की सतह से पोषक माध्यम में नहीं आते हैं। इसके लिए कड़ाई से पालन करना आवश्यक है निम्नलिखित तरकीबें:

1) फसलें सीधे एक जले हुए बर्नर के पास बनाई जाती हैं, जिसकी लौ में लूप, चिमटी, कॉटन प्लग, टेस्ट ट्यूब के किनारों को निष्फल कर दिया जाता है;

2) में बायां हाथएक परखनली को उपसंस्कृति संस्कृति के साथ लें, दूसरी (बाँझ पोषक माध्यम के साथ) अंगूठे और तर्जनी के बीच एक झुकी हुई स्थिति में रखी जाती है;

3) लूप को बर्नर की लौ के ऊपर एक ऊर्ध्वाधर स्थिति में रखा जाता है और इसके धातु के हिस्से को लाल-गर्म कैलक्लाइंड किया जाता है, और फिर क्षैतिज रूप से झुकाया जाता है और लूप धारक को निष्फल किया जाता है;

4) रूई की छड़ें निकाल लें और उन्हें दाहिने हाथ की अनामिका और छोटी उंगली से पकड़ें; मेज पर या किसी वस्तु पर कॉर्क लगाने की अनुशंसा नहीं की जाती है;

5) दोनों ट्यूबों के किनारों को जलाएं;

6) टेस्ट ट्यूब में एक लूप डालें जिसमें संस्कृति को सावधानीपूर्वक उपसंस्कृत किया जाए, दीवारों को छुए बिना, तरल की एक बूंद या ठोस माध्यम पर पट्टिका की एक छोटी मात्रा को पकड़ें और स्थानांतरित करें, दीवारों को छूने की कोशिश न करें, दूसरे में एक घटिया पोषक माध्यम के साथ टेस्ट ट्यूब;

7) लूप को बाहर निकाल दिया जाता है, टेस्ट ट्यूब के किनारों और स्टॉपर्स के अंदरूनी सिरों को जला दिया जाता है। यदि कॉटन प्लग में आग लग जाए, तो परखनली को इससे बंद कर दें, और बाहरी सिरे को हाथ या चिमटी से बुझा दें;

8) लूप को फिर से एक लौ में निकाल दिया जाता है, टेस्ट ट्यूब पर एक उपयुक्त शिलालेख बनाया जाता है: संस्कृति का नाम और बुवाई की तारीख।

तरल माध्यम में बुवाईपाश्चर या स्नातक पिपेट के साथ उत्पादित किया जा सकता है। पाश्चर पिपेट का उपयोग करते समय, जले हुए चिमटी का उपयोग करके सीलबंद सिरे को तोड़ दें और पूरे पिपेट को हल्का जला दें। अध्ययन के तहत संस्कृति के साथ टेस्ट ट्यूब को बाएं हाथ में रखा जाता है, और पिपेट को अंगूठे और मध्यमा उंगलियों के बीच दाईं ओर रखा जाता है, इसे पकड़कर शीर्ष छेदतर्जनी।

परखनली से कॉटन प्लग निकालने के बाद, परखनली के किनारों को जला दें। पिपेट को परखनली में सावधानी से नीचे करें और तर्जनी को हटा दें। फिर पिपेट के ऊपरी उद्घाटन को तर्जनी से बंद कर दें, परखनली से निकाल लें। कॉटन प्लग और टेस्ट ट्यूब के किनारों को बंद करने से पहले निकाल दिया जाता है। परीक्षण सामग्री को एक तरल माध्यम में स्थानांतरित किया जाता है। टीका लगाने के बाद, पिपेट को कीटाणुनाशक घोल में रखा जाता है।

ठोस मीडिया पर बोना।तिरछी अगर पर बुवाई करते समय, एक सीधा या ज़िगज़ैग स्ट्रोक लगाया जाता है। ऐसा करने के लिए, टीका सामग्री के साथ लूप को टेस्ट ट्यूब में पेश किया जाता है जब तक कि संक्षेपण पानी नीचे जमा नहीं हो जाता है और ध्यान से, अगर को ढीला किए बिना, एक स्ट्रोक लगाया जाता है। तिरछी अगर की पूरी सतह पर इनोकुलम को सूंघकर ठोस टीकाकरण प्राप्त किया जाता है।

पेट्री डिश में घने माध्यम पर, टीकाकरण निम्नानुसार किया जाता है। परखनलियों में पोषक माध्यम को उबलते पानी के स्नान में पिघलाया जाता है, 48-50 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किया जाता है और 3-5 मिमी ऊंची एक समान परत में बाँझ कप में डाला जाता है। ठोस माध्यम को थर्मोस्टैट में बंद कपों में 20-30 मिनट के लिए सुखाया जाता है। खुले कपों को स्टेराइल पेपर से ढके थर्मोस्टेट अलमारियों पर उल्टा रखा जाता है। कप के बगल में ढक्कन रखे जाते हैं। सुखाने के दौरान, पोषक माध्यम की सतह और कपों की आंतरिक सतह से संघनन का पानी वाष्पित हो जाता है। बुवाई एक लूप के साथ समानांतर स्ट्रोक के रूप में या एक ग्लास स्पैटुला के साथ की जाती है।

सूक्ष्म जीवों के प्रकार का निर्धारण करते समय और अवायवीय जीवों को उगाने के लिए, वे उत्पादन करते हैं इंजेक्शन द्वारा बुवाईअगर या जिलेटिन के एक कॉलम में। ऐसा करने के लिए, परखनली को उल्टा कर दिया जाता है और इनोकुलम के साथ एक लंबी सीधी सुई के साथ माध्यम के एक स्तंभ को ऊपर से नीचे तक बहुत नीचे तक छेद दिया जाता है। फिर सुई को सावधानीपूर्वक हटा दिया जाता है और परखनली को जले हुए रुई के प्लग से बंद कर दिया जाता है। यदि संक्रमण के खिलाफ विशेष सावधानी बरतने की जरूरत है, तो शुद्ध संस्कृतियों को फिर से बोने के लिए एक विशेष कैबिनेट में फसलों को ले जाया जाता है। इनोक्यूलेटेड ट्यूब और पेट्री डिश को ग्रोथ इनक्यूबेटर में रखा जाता है।

पोषक माध्यम के अंदर या उनकी सतह पर स्थित सूक्ष्मजीव और बीजाणु गति नहीं कर सकते हैं, लेकिन उस स्थान पर बने रहते हैं जहां वे जमने के समय थे। प्रत्येक कोशिका या बीजाणु गुणा करना शुरू करते हैं और 2-3 दिनों के बाद बनते हैं कॉलोनी - बड़ी राशिएक ही प्रकार की कोशिकाएँ। यदि एक ही कोशिका से एक कॉलोनी बनी है, तो यह उस सूक्ष्मजीव की शुद्ध संस्कृति होगी जिसकी कोशिका से यह विकसित हुआ है।

बढ़ती कॉलोनियों को पहले नग्न आंखों से देखा जाता है, और फिर एक आवर्धक कांच के साथ या माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है। साथ ही, यह नोटिस करना असंभव नहीं है कि उपनिवेश उपस्थिति, रंग, संरचना इत्यादि में भिन्न होते हैं।

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का उपयोग रोगी से प्राप्त सामग्री से शुद्ध संस्कृति में रोगज़नक़ को अलग करना और गुणों के एक परिसर के अध्ययन के आधार पर इसकी पहचान करना संभव बनाता है। अधिकांश बैक्टीरिया विभिन्न कृत्रिम पोषक माध्यमों (क्लैमाइडिया और रिकेट्सिया को छोड़कर) पर खेती करने में सक्षम हैं, इसलिए कई संक्रामक रोगों के निदान में बैक्टीरियोलॉजिकल विधि महत्वपूर्ण है।

यदि एक सकारात्मक परिणाम प्राप्त होता है, तो बैक्टीरियोलॉजिकल विधि रोगाणुरोधी दवाओं के लिए पृथक रोगज़नक़ की संवेदनशीलता को निर्धारित करना संभव बनाती है। हालांकि, इस अध्ययन की प्रभावशीलता कई मापदंडों पर निर्भर करती है, विशेष रूप से संग्रह की स्थितिऔर उसका परिवहनप्रयोगशाला को।

प्रति बुनियादी आवश्यकताएंबैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के लिए सामग्री के चयन और परिवहन के लिए आवश्यकताओं में शामिल हैं:

• एटियोट्रोपिक उपचार की शुरुआत से पहले सामग्री लेना;
• सामग्री एकत्र करते समय बाँझपन की स्थिति का पालन;
• सामग्री संग्रह की तकनीकी शुद्धता;
• पर्याप्त मात्रा में सामग्री;
• सामग्री के भंडारण और परिवहन के तापमान शासन को सुनिश्चित करना;
• सामग्री के संग्रह और घने पोषक माध्यम पर बुवाई के बीच न्यूनतम समय अंतराल में कमी।

प्रयोगशाला में सामग्री का परिवहन जल्द से जल्द किया जाना चाहिए, लेकिन इसे लेने के 1-2 घंटे के भीतर नहीं। सामग्री के नमूने एक निश्चित तापमान पर होने चाहिए; विशेष रूप से, सामान्य रूप से बाँझ सामग्री (रक्त, मस्तिष्कमेरु द्रव) को संग्रहित किया जाता है और 37 डिग्री सेल्सियस पर प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है। गैर-बाँझ सामग्री (मूत्र, निर्वहन) श्वसन तंत्रआदि) कमरे के तापमान पर 1-2 घंटे से अधिक या 4 डिग्री सेल्सियस (घरेलू रेफ्रिजरेटर की स्थिति) पर एक दिन से अधिक नहीं संग्रहीत किए जाते हैं। यदि निर्धारित समय सीमा के भीतर नमूनों को प्रयोगशाला में पहुंचाना असंभव है, तो संरक्षण स्थितियों के तहत रोगजनकों की व्यवहार्यता को संरक्षित करने के लिए डिज़ाइन किए गए परिवहन मीडिया का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।

अनुसंधान के लिए रक्तबुखार की शुरुआत में, शरीर के तापमान में वृद्धि के दौरान रोगी से लिया जाना चाहिए। 4-6 घंटे के अंतराल के साथ लिए गए 3-4 रक्त नमूनों की जांच करने की सिफारिश की जाती है, जो "लापता" क्षणिक जीवाणु के जोखिम को कम करने और पृथक रक्त की एटियलॉजिकल भूमिका की पुष्टि करने की क्षमता को बढ़ाने के मामले में उचित है। सशर्त रूप से रोगजनक माइक्रोफ्लोरायदि यह माइक्रोफ्लोरा शिरापरक रक्त के कई नमूनों में पाया जाता है। एक वयस्क में 10 मिली और बच्चों में 5 मिली की मात्रा में रक्त का नमूना 1:10 के अनुपात में एरोबिक और एनारोबिक सूक्ष्मजीवों के लिए एक माध्यम के साथ कम से कम दो शीशियों में लगाया जाता है। धमनी रक्त का एक एकल अध्ययन भी वांछनीय है।

लेना मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसजे) एक डॉक्टर द्वारा एक सूखी बाँझ ट्यूब में 1-2 मिलीलीटर की मात्रा में काठ का पंचर के साथ निर्मित किया जाता है। सैंपल को तुरंत लैब में पहुंचाया जाता है, जहां उसकी स्टडी भी तुरंत शुरू कर दी जाती है। यदि यह संभव नहीं है, तो सामग्री को कई घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जाता है। राशि में उल्लेखनीय वृद्धि सकारात्मक नतीजेबैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा, सीएसएफ की 1-2 बूंदों को ग्लूकोज के साथ एक अर्ध-तरल माध्यम युक्त टेस्ट ट्यूब में और "रक्त" अगर के साथ पेट्री डिश में टीका लगाना। सामग्री भेजने के लिए, इज़ोटेर्मल बॉक्स, हीटिंग पैड, थर्मोज़ या कोई अन्य पैकेजिंग जहां तापमान लगभग 37 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा जाता है, का उपयोग किया जाता है।

मलमूत्रबैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के लिए, उन्हें एक कसकर बंद ढक्कन के साथ एक बाँझ बर्तन में 3-5 ग्राम की मात्रा में बाँझ लकड़ी के स्थानिक के साथ लिया जाता है। ली गई सामग्री का अध्ययन 2 घंटे बाद शुरू नहीं किया जाना चाहिए। यदि इस समय के दौरान अध्ययन शुरू करना असंभव है, तो थोड़ी मात्रा में सामग्री का चयन किया जाना चाहिए और उचित परिवहन माध्यम में रखा जाना चाहिए। मल का चयन करते समय, सामग्री में प्रवेश करने वाले जीवाणुनाशक गुणों के साथ रक्त अशुद्धियों से बचने के लिए, अनुसंधान के लिए रोग संबंधी अशुद्धियों (बलगम, मवाद, उपकला कण, आदि) को भेजने का प्रयास करना चाहिए।

सामग्री लेने के लिए, रेक्टल स्वैब (एक कपास टिप के साथ) का उपयोग किया जा सकता है। स्वाब को बाँझ आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान या परिवहन माध्यम (तेल जेल नहीं) के साथ सिक्त किया जाना चाहिए। इसे प्रति मलाशय में 5-6 सेमी की गहराई तक पेश किया जाता है और टैम्पोन को मोड़ते हुए, टैम्पोन पर फेकल रंग की उपस्थिति को नियंत्रित करते हुए, इसे ध्यान से हटा दें। यदि सामग्री का अध्ययन 2 घंटे के भीतर शुरू हो जाता है, तो स्वाब को एक सूखी परखनली में रखा जाता है, अन्यथा - परिवहन माध्यम में।

मूत्र(स्वतंत्र रूप से जारी मूत्र का एक औसत भाग) 3-5 मिलीलीटर की मात्रा में बाहरी जननांग अंगों के पूरी तरह से शौचालय के बाद एक बाँझ डिश में एकत्र किया जाता है। मूत्र के सुबह के हिस्से को लेना बेहतर होता है।

पित्तके दौरान एकत्र डुओडनल साउंडिंगउपचार कक्ष में अलग-अलग भाग ए, बी और सी में तीन बाँझ परीक्षण ट्यूबों में, सड़न रोकनेवाला के नियमों का पालन करते हुए।

पेट का पानी धो लें 20-50 मिलीलीटर की मात्रा में बाँझ जार में एकत्र किया जाता है। यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि इन मामलों में गैस्ट्रिक पानी से धोना केवल उदासीन (सूक्ष्मजीवों पर बैक्टीरियोस्टेटिक या जीवाणुनाशक प्रभाव नहीं) समाधान के साथ किया जाता है - अधिमानतः उबला हुआ पानी (सोडा, पोटेशियम परमैंगनेट, आदि को जोड़ने के बिना)।

थूक. खांसने के दौरान निकलने वाले सुबह के थूक को एक बाँझ जार में एकत्र किया जाता है। खांसने से पहले, रोगी अपने दांतों को ब्रश करता है और अपने मुंह को उबले हुए पानी से धोता है ताकि यांत्रिक रूप से भोजन के मलबे, डिक्वामेटेड एपिथेलियम और माइक्रोफ्लोरा को हटा दिया जा सके। मुंह.

ब्रोंची का फ्लशिंग पानी. ब्रोंकोस्कोपी के दौरान, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के 5 मिलीलीटर से अधिक इंजेक्शन नहीं लगाया जाता है, इसके बाद एक बाँझ ट्यूब में चूषण होता है।

ग्रसनी, मौखिक गुहा और नाक का निर्वहन. मौखिक गुहा से सामग्री को खाली पेट या खाने के 2 घंटे बाद एक बाँझ कपास झाड़ू या श्लेष्म झिल्ली और उसके प्रभावित क्षेत्रों से लार ग्रंथियों के नलिकाओं के प्रवेश द्वार पर, जीभ की सतह से लिया जाता है। घाव यदि कोई फिल्म है, तो बाद वाले को बाँझ चिमटी से हटा दिया जाता है। नाक गुहा से सामग्री एक सूखे बाँझ कपास झाड़ू के साथ ली जाती है, जिसे नाक गुहा में गहराई से डाला जाता है। नासॉफरीनक्स से सामग्री को एक बाँझ पश्च ग्रसनी कपास झाड़ू के साथ लिया जाता है, जिसे नासॉफिरिन्क्स में नाक के उद्घाटन के माध्यम से सावधानीपूर्वक डाला जाता है। यदि एक ही समय में खांसी शुरू होती है, तो खांसी समाप्त होने तक स्वाब को नहीं हटाया जाता है। डिप्थीरिया के लिए विश्लेषण करने के लिए, नाक और ग्रसनी से फिल्मों और बलगम की एक साथ जांच की जाती है, सामग्री को अलग-अलग स्वाब के साथ लिया जाता है।

सूक्ष्म पोषक तत्वों की अलग-अलग कॉलोनियों के विकास को प्राप्त करने के लिए विशेष तकनीकों का उपयोग करके ठोस पोषक मीडिया पर परीक्षण सामग्री को टीका लगाया जाता है, जिसे रोगज़नक़ की शुद्ध संस्कृति को अलग करने के लिए फिर से निकाला जाता है।

कुछ प्रकार के जीवाणुओं को ऐच्छिक (चयनात्मक) माध्यमों का उपयोग करके पृथक किया जाता है जो विदेशी सूक्ष्मजीवों के विकास को रोकते हैं या ऐसे पदार्थ होते हैं जो कुछ रोगजनक रोगाणुओं के विकास को प्रोत्साहित करते हैं।

पोषक तत्व मीडिया पर अलग-थलग पड़े सूक्ष्मजीव पहचान लो, अर्थात। उनकी प्रजातियों या प्रकार की संबद्धता का निर्धारण करें। वी हाल ही मेंस्वास्थ्य देखभाल अभ्यास में पहचान के लिए, माइक्रोटेस्ट सिस्टम का उपयोग किया जाता है, जो कि विभेदक नैदानिक ​​वातावरण के एक सेट के साथ पैनल होते हैं, जो अध्ययन को गति देते हैं। एक तरल पोषक माध्यम में एक एंटीबायोटिक को पतला करके रोगाणुरोधी दवाओं के लिए सूक्ष्मजीवों की संवेदनशीलता को निर्धारित करने के लिए माइक्रोटेस्ट सिस्टम का भी उपयोग किया जाता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन के परिणामों का मूल्यांकन करते समय, डॉक्टर को यह ध्यान रखना चाहिए कि एक नकारात्मक परिणाम का मतलब हमेशा एक रोगज़नक़ की अनुपस्थिति नहीं होता है और यह रोगाणुरोधी दवाओं, उच्च रक्त माइक्रोसाइडल गतिविधि और तकनीकी त्रुटियों के उपयोग से जुड़ा हो सकता है। के संबंध में रोगी से सामग्री में रोगजनक सूक्ष्म जीव का पता लगाना नैदानिक ​​तस्वीरदीक्षांत, स्वस्थ या क्षणिक बैक्टीरियल कैरिज के मामले में संभव है।

सशर्त रूप से रोगजनक सूक्ष्मजीवों (एपिडर्मल स्टेफिलोकोकस ऑरियस, कोलाई) और यहां तक ​​​​कि सैप्रोफाइट्स को बैक्टरेरिया की अभिव्यक्ति माना जाना चाहिए, खासकर अगर ये रोगाणु एक से अधिक सामग्री के नमूने या विभिन्न सब्सट्रेट्स (रक्त, मूत्र) में पाए जाते हैं, क्योंकि शरीर की प्रतिरक्षा में कमी के साथ, ये और अन्य "गैर-रोगजनक" "सूक्ष्मजीव रोगजनक हो सकते हैं" संक्रामक प्रक्रियाएंसेप्सिस सहित।

एक निश्चित कठिनाई है गैर-बाँझ मीडिया के बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के परिणामों की व्याख्या, अर्थात् अवसरवादी सूक्ष्मजीवों की एटियलॉजिकल भूमिका का प्रमाण। इस मामले में, पृथक संस्कृतियों के प्रकार, सामग्री में किसी दिए गए प्रकार की माइक्रोबियल कोशिकाओं की संख्या, रोग के दौरान उनके बार-बार अलगाव, एक मोनोकल्चर की उपस्थिति या एक सूक्ष्मजीव के संघ जैसे संकेतकों को ध्यान में रखा जाता है। एक परिसर में।

युशचुक एन.डी., वेंगेरोव यू.वाई.ए.