2.体液性および細胞性免疫の状態を評価するための方法。 生物の免疫状態の評価。

臨床免疫学は、患者の診断と治療を扱う臨床および実験室の分野です。 さまざまな病気免疫学的メカニズムに基づく病的状態、ならびに免疫製剤が主要な役割を果たす治療および予防の状態。

免疫状態は構造的および機能的状態です 免疫系個人、臨床および実験室の免疫学的パラメーターの複合体によって決定されます。

したがって、免疫状態は、免疫系の解剖学的および機能的状態、すなわち、所与の時間に特定の抗原に応答するその能力を特徴付ける。

次の要因が免疫状態に影響を与えます。

気候-地理的; 社交; 環境（物理的、化学的および生物学的）; 「医療」（薬物、外科的介入、ストレスなどの影響）。

気候的および地理的要因の中で、免疫状態は、温度、湿度、日射量、日照時間などの影響を受けます。たとえば、食作用反応と皮膚アレルギー検査は、南部の住民よりも北部の住民の方が顕著ではありません。 白人のエプスタインバーウイルスは原因 感染-単核球症、ネグロイド人種の人-腫瘍病理学（バーキットリンパ腫）、および黄色人種の人-完全に異なる腫瘍病理学（鼻咽頭癌）、そして男性のみ。 アフリカ人はヨーロッパ人よりジフテリアの影響を受けにくいです。

免疫状態に影響を与える社会的要因には、栄養、生活条件、職業上の危険などがあります。免疫グロブリンの合成と免疫担当細胞の構築に必要な物質が食物とともに体内に入るため、バランスの取れた合理的な食事が重要です。機能しています。 必須アミノ酸とビタミン、特にAとCが食事に含まれていることが特に重要です。

生活条件は、生物の免疫状態に大きな影響を及ぼします。 劣悪な住居条件で生活することは、全体的な生理学的反応性、それぞれ免疫反応性の低下につながり、それはしばしば感染症の罹患率のレベルの増加を伴います。

人は人生のかなりの部分を仕事に費やしているため、職業上の危険は免疫状態に大きな影響を及ぼします。 身体に悪影響を及ぼし、免疫反応性を低下させる可能性のある生産要素には、電離放射線、化学物質、微生物とその代謝産物、温度、ノイズ、振動などがあります。放射線源は現在、さまざまな産業（エネルギー、鉱業、化学物質）で非常に広く普及しています。 、航空宇宙など）。

塩は免疫状態に悪影響を及ぼします ヘビーメタル、芳香族、アルキル化化合物、および洗剤、消毒剤、殺虫剤、殺虫剤を含む他の化学物質。実際に広く使用されています。 このような職業上の危険は、化学、石油化学、冶金産業などの労働者に影響を及ぼします。

体の免疫状態への悪影響は、抗生物質、ワクチン、酵素、ホルモン、飼料タンパク質などの生産に関連するバイオテクノロジー産業の労働者の微生物とその代謝産物（ほとんどの場合、タンパク質とその複合体）によって発揮されます。

低温または高温、騒音、振動、低光などの要因は、免疫反応性を低下させ、神経系および神経系を介して免疫系に間接的な影響を与える可能性があります 内分泌系これらは免疫系と密接に関連しています。

環境要因は、人の免疫状態に地球規模の影響を及ぼします。主に、放射性物質による環境汚染（原子炉からの使用済み燃料、事故時の原子炉からの放射性核種の漏出）、農業における農薬の広範な使用、化学企業や車両からの排出、バイオテクノロジー産業。

免疫状態は、さまざまな診断および治療の医学的操作、薬物療法、およびストレスの影響を受けます。 不合理で頻繁なX線撮影の使用、放射性同位元素スキャンは免疫系に影響を与える可能性があります。 外傷や手術後の免疫反応性の変化。 多くの 薬抗生物質を含む、特に長期間の使用では、免疫抑制の副作用が生じる可能性があります。 ストレスは、主に中枢神経系を介して作用する免疫のTシステムの働きに障害をもたらします。

免疫学的パラメーターは標準で変動しますが、免疫状態は、非特異的耐性因子、体液性（Bシステム）および細胞性（Tシステム）免疫の状態の評価を含む一連の臨床検査を設定することによって決定できます。 。

免疫状態の評価は、臓器や組織の移植、自己免疫疾患、アレルギー、さまざまな感染症や体性疾患の免疫不全を検出し、免疫系の障害に関連する疾患の治療の有効性を監視するためにクリニックで行われます。 。 検査室の能力に応じて、免疫状態の評価は、ほとんどの場合、以下の一連の指標の決定に基づいています。

1）一般的な臨床検査;

2）自然抵抗係数の状態。

3）体液性免疫;

4）細胞性免疫;

5）追加のテスト。

一般的な臨床検査では、患者の愁訴、既往歴、臨床症状、一般的な血液検査の結果（リンパ球の絶対数を含む）、および生化学的データが考慮されます。

体液性免疫は、血清中のクラスG、M、A、D、Eの免疫グロブリンのレベル、特異抗体の数、免疫グロブリンの異化作用、即時過敏症、末梢血中のBリンパ球の指標、芽球形質転換によって決定されますB細胞マイトジェンおよび他のテストの影響下でのBリンパ球の分析。

細胞性免疫の状態は、Tリンパ球の数、末梢血中のTリンパ球の亜集団、T細胞マイトジェンの影響下でのTリンパ球の芽球形質転換、胸腺ホルモンの測定、分泌されたサイトカイン、およびアレルゲンによる皮膚検査は、ジニトロクロロベンゼンとの接触感作です。 アレルギー性皮膚検査では、通常は感作されるはずの抗原を使用します。たとえば、ツベルクリンを使用したマントー検査などです。 一次免疫応答を誘発する身体の能力は、ジニトロクロロベンゼンとの接触感作によって与えることができます。

免疫状態を評価するための追加のテストとして、血清の殺菌™の測定、補体のC3、C4成分の滴定、血清中のC反応性タンパク質の含有量の測定、測定などのテストを使用できます。リウマチ因子および他の自己抗体の。

したがって、免疫状態の評価は、免疫系の体液性部分と細胞性部分の両方の状態、および非特異的耐性因子の評価を可能にする多数の臨床検査に基づいて実行されます。 すべてのテストは、第1レベルと第2レベルのテストの2つのグループに分けられます。 レベル1のテストは、プライマリヘルスケアの臨床免疫学研究所で実施でき、明白な免疫病理学を持つ個人の初期識別に使用されます。 より正確な診断のために、第2レベルのテストが使用されます。

免疫のBシステム（体液性免疫）の評価。

免疫のBシステムを評価するためにいくつかの方法が使用されます。

血中のBリンパ球の測定。 このタイプのリンパ球の3つの特性が使用されます。

可用性補体受容体は、いわゆる補体ロゼットを数えることを可能にします。 リンパ球は、表面に抗体補体複合体（EAC-ロゼット形成）を運ぶ赤血球とロゼットを形成します。 リンパ球だけでなく、顆粒球もロゼットを形成することができます。 I. Wong、A。Wilsonは、1975年に、好中球によるEAおよびEACロゼット形成をステージングする手法を説明しました。これにより、これらの細胞にFc受容体が存在することが証明されました。 1976年、I。V。Petrova etal。 は、好中球がラム赤血球とロゼットを自発的に形成する能力を説明し、この好中球の亜集団は免疫抑制療法によって劇的に増加することが示されました。 リンパ球との類似性により、好中球は自発的なロゼット細胞、相補的なロゼット細胞、およびヌル細胞に分けられます。 で 健康な人自発的なロゼット形成好中球は25〜35％であり、補完的である-14〜20％です。

ご飯。 1.B細胞のロゼット形成。

可用性 Bリンパ球では、免疫グロブリンのFcフラグメントの受容体は、凝集したγ-グロブリンをそれ自体に吸着するという事実につながります。 Bリンパ球は、γ-グロブリンの標識凝集体を使用した蛍光法またはX線撮影法を使用して検出できます。 ヒトBリンパ球はマウス赤血球とロゼットを形成します。 最後に、抗グロブリン血清を使用するクーンズ免疫蛍光法の助けを借りて、免疫グロブリン決定因子を有するすべてのリンパ球、すなわちBリンパ球を検出およびカウントすることが可能です。 この場合、IgM-、IgGまたは1gA-決定基を運ぶ細胞の分化したカウントを実行することができます。 B細胞の割合だけでなく、B細胞の割合も決定する必要があります 絶対量 1 µlの血液に。

意味免疫グロブリンの血中濃度。 免疫グロブリンの総濃度と異なるクラスの免疫グロブリンの数が決定されます。 最初の方法は、硫酸亜鉛で塩析した後、タービジメトリー評価、電気泳動、または免疫電気泳動を行うことによって行われます。 ヒトの総免疫グロブリンの正常レベルは10から20g / lの範囲です。 IgM、IgG、およびIgAの量の測定は、ほとんどの場合、Manciniによる放射状免疫拡散法によって行われます。 IgEはラジオイムノアッセイによって決定されます。 基準の上限は0.0005g / lです。

意味血清中の等血球凝集素の存在とレベル、および広範な細菌やウイルスに対する天然（正常）抗体。 抗原として使用できます 大腸菌、ブドウ球菌毒素、ヘルペスウイルスなど。ά-およびβ-イソヘマグルチニンはIgMに属することに留意する必要があります。

勉強いくつかの不活化ワクチンによる能動免疫後の抗体産生（一次および二次応答）。 百日咳と殺されたポリオワクチン、ジフテリアと破傷風のトキソイド、肺炎球菌、髄膜炎菌、細菌から分離された多糖類抗原を適用します 腸のグループ。 いくつかの抗原を使用する必要性は、免疫応答の遺伝的に決定された特異性に関連しています。 いずれか1つの抗原に対して低い免疫応答が得られるのは、この個体がこの抗原の応答性の低い遺伝子型に属しているという事実の結果である可能性があります。 他の抗原に対する反応は正常かもしれません。 そのため、Bシステムの機能的劣性の診断は、いくつかの異なる抗原に対する免疫応答が抑制されている場合にのみ行うことができます。

異化作用の研究体内の免疫グロブリン。 ヒト免疫グロブリンの標識製剤を血液に注射します。 血液からのラベルのクリアランスと尿および糞便へのその蓄積により、免疫グロブリンの半減期を決定することが可能になります。 IgGの通常の半減期は24日です。 滲出性腸症、ネフローゼおよび他のいくつかの疾患では、免疫グロブリンの過剰代謝の状態が発生します。 それらの選択的高異化作用の事実を確立するために、標識されたアルブミンの半減期が並行して決定される。

生検 リンパ節 、骨髄、腸粘膜の切片。 この手順は、形質細胞、リンパ濾胞の存在および構造の組織学的検出を目的として実行されます。 即時型過敏症を示す皮膚反応。 これらのテストにはPAS反応が含まれます。 ジフテリア毒素に対する抗体を持っているジフテリアに対して免疫された人々では、この毒素の皮内注射は典型的な紅斑の発症を引き起こしません。

Bリンパ球による免疫グロブリン生合成の刺激試験管内で。 ヨウシュヤマゴボウのマイトジェンなどの一部のマイトジェンは、Bリンパ球のポリクローナル刺激を引き起こす能力があるため、ヒトの血液からのBリンパ球の機能的活性の評価が可能です。 免疫グロブリンを合成するB細胞の「総」産生は、マイトジェンでリンパ球を培養してから7〜12日後にラジオイムノアッセイによって培養液中で測定されます。

ご飯。 2.体液性免疫反応。

Bリンパ球は抗体を産生し、外来抗原（細菌やウイルスによって運ばれる）を認識して除去するのに役立ちます。 それらは、血液中を循環するTリンパ球とマクロファージによって支援されます。

a）ウイルス粒子は表面細胞を介して組織に浸透し、増殖します。

b）マクロファージはウイルス粒子をむさぼり食う

c）マクロファージは、血液中を循環しているTリンパ球に抗原を伝達します。 これにより、追加の数のTリンパ球とBリンパ球が動員されます。

d）Bリンパ球は、侵入するウイルスに特異的な抗体を産生する形質B細胞とメモリーB細胞に分解されます。

e）血液中を循環する抗体はウイルス粒子と相互作用します。

f）マクロファージはウイルスを認識して食い尽くし、感染から体を保護します。

図3。 免疫応答中の細胞の相互作用。

Tヘルパー受容体は、Ag提示細胞の表面に露出したクラス11 MHC分子とともに抗原決定基（エピトープ）を認識します。 TヘルパーCD4の分化Agは分子相互作用に関与しています。 このような相互作用の結果として、Ag提示細胞はIL-1を分泌し、TヘルパーでのIL-2の合成と分泌、およびIL-2の同じTヘルパーの合成と取り込みを刺激します。原形質膜への受容体。 IL-2はTヘルパーの増殖を刺激し、細胞傷害性Tリンパ球を活性化します。 Bリンパ球の選択は、Agとこれらの細胞の表面にあるIgMのFabフラグメントとの相互作用によって行われます。 クラスIIMHC分子と組み合わせたこのAgのエピトープは、Tヘルパー受容体を認識し、その後、サイトカインがTリンパ球から分泌され、Bリンパ球の増殖と、このAgに対する抗体を合成する形質細胞への分化を刺激します。 。 細胞傷害性Tリンパ球受容体は、ウイルス感染細胞または腫瘍細胞の表面にあるMHCクラスI分子と複合体を形成して抗原決定基に結合します。 細胞傷害性Tリンパ球CD8の分化Agは分子相互作用に関与しており、相互作用する細胞の分子が結合した後、細胞傷害性Tリンパ球は標的細胞を殺します。

米。 5.体液性免疫応答の発生中の相互作用の3細胞システム。

Bリンパ球は、異物を吸収したマクロファージから抗原に関する特異的な情報を受け取り、抗原認識後にTリンパ球によって分泌される免疫形成（II）誘導物質から非特異的な情報を受け取ります。 3種類の細胞すべてが協力する状態では、本格的な免疫応答が発生します。 B細胞がマクロファージから抗原に関する情報のみを受け取り、T細胞からの助けがない場合、特定の無反応耐性が誘導されます。 B細胞に作用する場合、IIのみが非特異的免疫グロブリンの合成を引き起こします。

米。 6.体液性免疫応答の誘導中の胸腺の細胞（T細胞の供給源）と骨髄の細胞（B細胞の供給源）の間の相互作用。

体液性応答は、いくつかの細胞型を含む複雑なプロセスとして発生します。 骨髄細胞のみ-BCM（Bリンパ球）または胸腺細胞のみ-TFC（T細胞）の照射マウスへの導入は、十分な強度の免疫応答の発生を保証しません。 同時に、これらの細胞の混合物の導入は、赤血球に対する抗体の集中的な産生の形成につながります。 さらに、そのような細胞の共同導入による応答は、異なる起源の細胞の別々の投与による応答の合計よりもはるかに高い。 そうでなければ協力 さまざまなタイプ細胞は相乗効果をもたらします。 応答は、脾臓のプラーク形成細胞（PCC）の数によって評価されました。

米。 7.体液性免疫応答の発達。

抗体産生の誘導に関与するリンパ球の亜集団を考慮に入れ、IgM合成をIgG合成に切り替え、メモリー細胞を作成する「トータル」スキーム。 マクロファージ（MF）によって捕捉された抗原（AG）は、免疫原性の形で細胞表面に表示されます。 表現型を持つ「初期」Tヘルパーは高血圧の認識反応に入り、抗体産生を助ける「後期」Tヘルパーの成熟に寄与します。 一次IgM応答の開発には、TxLut1の支援は必要ありません。 IgM抗体（PC IgM）を産生する形質細胞の蓄積には、MF表面でのAGの単純な認識で十分であることは明らかです。 ただし、Tx Lut1の助けは、IgM合成からIgG合成への細胞内スイッチング、IgGを合成および分泌する形質細胞の蓄積（IgG PC）、および二次免疫応答へのメモリー細胞（IgG PC）の侵入に必要です。

細胞性免疫応答は、外来細胞の表面のクラスI MHC分子、または自身のウイルス感染の表面のクラスI MHC分子と複合体を形成した内因性免疫原と組み合わせて抗原と反応する、拘束された免疫担当細胞の増殖を特徴とします。と腫瘍細胞。 細胞傷害性Tリンパ球は細胞性免疫応答に関与しています。 細胞傷害性Tリンパ球（TC）。 標的細胞の表面に存在するAgは、クラスI MHC分子と組み合わせて、細胞傷害性Tリンパ球受容体に結合します。 Tc細胞膜のCD8分子がこのプロセスに関与しています。 TヘルパーIL-2によって分泌され、細胞傷害性Tリンパ球の増殖を刺激します。 標的細胞の破壊。 細胞傷害性Tリンパ球は標的細胞を認識して付着します。 活性化された細胞傷害性Tリンパ球の細胞質には、分泌細胞の貯蔵顆粒に似た小さな暗い細胞小器官があります。 顆粒は、標的細胞との接触点の近くにあるTキラーのその部分に集中しています。 並行して、細胞骨格の再配向と、顆粒が形成されるゴルジ複合体のこの領域へのシフトがあります。 それらは細胞溶解タンパク質パーフォリンを含んでいます。

Tキラーによって放出されたパーフォリン分子は、Ca2 +の存在下で標的細胞の膜で重合されます。 標的細胞の原形質膜に形成されたパーフォリンの細孔は、水と塩を通過させますが、タンパク質分子は通過させません。 カルシウムが過剰に存在する細胞外空間または血液中でパーフォリンの重合が起こると、ポリマーは膜に浸透して細胞を殺すことができなくなります。 Tキラーの特定の作用は、それと標的細胞との密接な接触の結果としてのみ現れます。これは、犠牲者の表面のAgとTキラー受容体との相互作用によって達成されます。 Tキラー自体はパーフォリンの細胞傷害性作用から保護されています。 自己防衛のメカニズムは不明です。 細胞傷害性Tリンパ球とNK細胞が標的細胞にすでに存在する自殺プログラムを誘発するシグナルの源であるという、標的細胞の破壊のための代替メカニズム。 この信号の作用は糖質コルチコイドによって増強されます。

A.体液性免疫の研究

1.Bリンパ球の数の決定。リンパ球の細胞膜には、モノクローナル抗体を使用したフローサイトメトリーで検出できる多くの糖タンパク質があります。 これらの糖タンパク質のいくつかは、Tリンパ球、Bリンパ球、NKリンパ球、Tリンパ球のさまざまな亜集団、単球、さらにはそれらの成熟と分化の特定の段階など、特定の細胞型に特異的です。 これらの分子は一般にCDと呼ばれます。 現在、多くのCDの機能が定義されています（表18.8を参照）。 研究結果を評価する際には、患者の年齢を考慮する必要があります。 さらに、試薬の品質と方法論の順守を常に監視する必要があります。これは、わずかな違反でも研究結果を歪めるためです。 フローサイトメトリーを使用したBリンパ球の測定は、細胞表面に固定された免疫グロブリン、CD19およびCD20の検出に基づいています（表18.8を参照）。 年長の子供と大人では、Bリンパ球はすべての血液リンパ球の10〜20％を占めます。 若い年齢それらの多くがあります。

2.抗体価の決定。体液性免疫の欠如が疑われる場合は、タンパク質および多糖抗原に対する抗体の力価が評価されます。 通常、それらはワクチン接種または感染後に決定されます。

a。 タンパク質抗原に対する抗体。ほとんどの場合、ジフテリアおよび破傷風トキソイドに対するIgGは、DPTまたはDTPのワクチン接種の前と2〜4週間後に検査されます。 ほぼすべての成人がDTPワクチン接種を受けているため、再ワクチン接種後の抗体のレベルは二次免疫応答の指標です。 ヘモフィルスインフルエンザB型ワクチンの投与後、PRP抗原に対する抗体を検出することも可能です。この抗原は多糖類ですが、結合型ワクチンではタンパク質抗原として機能します。 抗体は、不活化ポリオワクチンと組換えB型肝炎ワクチンで免疫した後に検査されることがあります。免疫不全が疑われる場合、生ウイルスワクチンは禁忌です。

b。 多糖抗原に対する抗体。多糖類抗原、肺炎球菌および肺炎球菌に対する体液性免疫応答を評価するには 髄膜炎菌ワクチンタンパク質担体を含まない。 抗体価は、ワクチン接種の前と3〜4週間後に決定されます。 一部の研究所では、インフルエンザ菌B型に対する非抱合型ワクチンがこの目的で使用されており、患者の年齢を考慮して結果が評価されています。 したがって、2歳未満の子供では、多糖抗原に対する免疫応答が弱く、一部の子供では5年まで免疫応答が維持されます。 この点で、幼児への多糖類ワクチンの使用は不適切であり、禁忌でさえあります。それは、高齢者の免疫寛容と効果のない再ワクチン接種につながる可能性があるからです。

v。 一次および二次体液性免疫応答の評価。抗原のクリアランスを決定するために、IgM（一次免疫応答）およびIgG（二次免疫応答）のレベル、バクテリオファージFichi 174、人間にとって安全な細菌ウイルスがタンパク質抗原として使用されます。 胃鞘ヘモシアニン、組換えB型肝炎ワクチン、単量体フラゲリン、ダニ媒介性脳炎ワクチンも、一次体液性免疫応答を評価するために使用されます。

d。天然抗体（イソヘマグルチニン、ストレプトリジンOに対する抗体、ヒツジ赤血球に対する抗体などの異好性抗体）は通常、ほとんどすべての人の血清に存在します。 これは、これらの抗体が向けられている抗原が広く行き渡っており、 食品、呼吸可能な粒子、ミクロフローラ 気道.

3.IgGサブクラスの定義。再発する場合 細菌感染症気道、IgGの総レベルが正常またはわずかに低下しているか、IgAの孤立した欠乏が検出された場合、IgGのサブクラスの定義が示されます。 この場合、IgG 2欠損症を検出することができ（IgG 2はIgGの約20％を構成します）、これを分離するか、IgAまたはIgG4欠損症と組み合わせることができます。 覚えておく必要があります 機能評価体液性免疫応答は、IgGサブクラスの定量的測定よりも有益な研究方法です。 したがって、IgG 2のレベルが正常であると、肺炎連鎖球菌の多糖抗原に対する抗体のレベルが低下することがよくあります。 これに加えて、IgG 2の先天性欠損症は、重鎖の合成の違反により、 臨床症状免疫不全。

4.IgAの測定。正常な血清IgAを伴う分泌型IgAの孤立した欠乏はまれです。 原則として、分泌型IgAと血清IgAが同時に欠乏します。 孤立性IgA欠損症は、臨床的に沈黙しているか、軽度の上気道感染症を伴います。 これは、IgA欠乏症では、血清中のIgGと粘膜分泌物中のIgMのレベルが代償的に増加するという事実によるものです。 IgAレベルは、涙、唾液、その他の体液で測定されます。 IgAには、IgA1とIgA2の2つのサブクラスがあります。 IgA 1は気道の血液と分泌物で優勢であり、IgA2は消化管の分泌物で優勢です。 通常のパフォーマンス IgA1およびIgA2のレベル。

5.invitroでの免疫グロブリンの合成。このテストでは、刺激されたBリンパ球によるIgM、IgG、およびIgAの産生を測定します。 異なる刺激物で処理された健康なTリンパ球と病気のTリンパ球とBリンパ球を混合することにより、TヘルパーとBリンパ球の機能を評価することができます。 ほとんどの場合、抗体欠乏症は、Bリンパ球の形質細胞への分化障害が原因です。

6.リンパ節の生検の疑いで 原発性免疫不全症通常は生成しません。 診断が不明確で、患者のリンパ節が腫大している場合にのみ適応となり、血液芽細胞症の除外が必要になります。 生検は通常、抗原刺激の5〜7日後に行われます。 抗原はその領域に注入され、そこからリンパ節のグループに流れ込み、そのうちの1つが生検の対象となります。 リンパ節の体液性免疫の欠如により、形質細胞の数が減少し、一次濾胞の数が増加し、二次濾胞が存在せず、皮質物質の厚さが減少し、リンパ節組織の再構築が観察されます、そして時々マクロファージと樹状細胞の数が増加します。

1.第1レベルの方法は、抗原抗体システムにおける相互作用の証拠に基づいています。 陽性の結果は、反応の特異性を示しています。 原則として、3つのタイプの反応を区別することができます。

活用テスト。 この場合、試薬の1つにラベルが付けられ、物理的または物理的に基づいて他の試薬への結合によって結果が評価されます。 化学的特性コンジュゲート（直接免疫蛍光、免疫ペルオキシダーゼ法、オートラジオグラフィー）;

試薬の1つの特性の変化に基づくテスト（たとえば、蛍光、電位、溶液粘度の変化、高分子量の化合物の合成、抗原の酵素活性の変化）。 これらのテストの機能は限られています。

塩析、沈殿、使用の技術を使用した、結合していない試薬からの抗原-抗体複合体の分離に基づくテスト 特定の抗体または細胞表面への接着。 これらには、放射性および酵素結合免疫吸着測定法の大部分が含まれます。

2.第2レベルの方法は、抗原（多価）抗体（少なくとも二価抗体）間の相互作用のより複雑な性質に基づいています。 この場合、複合体の根底にある沈殿、凝集などのメカニズムは、第1レベルの方法よりも大幅に、pH、イオン強度、およびその他の反応条件に依存します。 そう 肯定的な結果抗原抗体反応の重症度を常に決定するわけではなく、陰性はこの反応がないことを意味するわけではありません。 それにもかかわらず、このグループの方法の中で、臨床診療にとって特に重要なそのような免疫学的検査にも注目することができます。

第2レベルの方法には、沈殿、凝集、補体結合反応などの反応が含まれます。 第1レベルと第2レベルの方法の中間の位置は、細胞溶解や好酸球の関与によるメディエーターの放出現象など、単離された細胞に関する研究によって占められています。

凝集現象に基づく反応。 凝集中の沈殿反応とは対照的に、抗原は小体の形で提示されるか（赤血球または細菌の直接凝集）、または担体粒子に結合します（間接変異、受動凝集）。 凝集のメカニズムはまだ完全には理解されていません。 ある理論によれば、主な役割は細胞表面への抗体の特異的吸着にあり、これは表面電位の低下または膜の疎水性の増加につながります。 この理論は、凝集と同様に、凝集が微量の電解質の存在に大きく依存するという事実によって裏付けられています。 別の概念によれば、これはマラックの「格子」理論に対応し、二価抗体の1つの活性中心が1つの抗原決定基と結合し、2番目の活性中心が別の決定基と結合すると凝集が起こります。 抗体の過剰または不足は、凝集の阻害につながります。 粒子サイズやIg構造などの特性はデータの解釈を修正しますが、それでもこの理論を支持する重要な議論があります。

沈殿と同様に、このメソッドは、凝集がまだ可能な最大血清希釈を決定する半定量分析として使用されます。 結果は巨視的に評価することができます。 凝集の感度は、抗原抗体システムによって大きく異なります。 さらに、凝集反応は沈殿反応よりも感度の高い方法です（ほぼ103回）。 最適な条件下で、0.05mlまでの最小濃度で抗体を検出することが可能でした。 Igの既知のクラスには、異なる凝集特性があります。 したがって、IgM分子が凝集する能力は、IgG分子の能力の60〜180倍です。

抗原が細胞膜の要素であるか、他の粒子（赤血球、細菌、花粉粒子）の表面に存在する場合、直接凝集反応が起こります。 この反応の定式化は、試験管（その後、結果は沈降後に評価されます）と特別なプレートに配置されたウェルの両方で実行されます。 特に、ヒトの血液型の決定は、凝集の現象に基づいて、一般的に受け入れられているエクスプレス法である。 血液型を特定するために、赤血球懸濁液の1滴を、特定の特異性の標準的な凝集血清の1滴と混合します。 肯定的な反応凝集物はすでに巨視的に見えますが、反応がない場合、赤血球懸濁液は均一なままです。

抗グロブリン試験（Coombs反応）。 抗グロブリン試験は、血清中に非凝集性または「不完全な」抗体が存在することを証明するのに役立ちます。 ほとんどの場合、この方法は免疫溶血によって引き起こされる血液疾患の診断に使用されます。 当初、研究者は（ヒトグロブリンに対して）抗グロブリン血清を使用していましたが、後に補体成分と反応することがわかりました。 現在、その代わりに、特定のクラスのIg（モノクローナル抗体）に対する単一特異性抗血清が集中的に導入されています。 テストの直接バージョンは、細胞に結合した「不完全な」抗体を検出するのに役立ちます。 間接変異体では、循環抗体が検出されます。テスト血清が赤血球とプレインキュベートされた後、直接テストが再現されます。 非凝集性自己抗体とリーギンの両方を検出するために、受動的血球凝集と組み合わせて抗グロブリン試験が開発されました。 そして最後に、間接蛍光技術も抗グロブリン試験の修正の1つです。

抗グロブリン消費試験（ステフェンテスト）。 この方法では注意が必要ですが、この場合はインジケーター反応のみを扱っています。 この検査では、組織細胞、細胞核、または不溶性組織要素の抗原に対する抗体を検出できます。 凝集反応試験を使用してこれらの抗体を決定することは不可能です。 間接試験では、抗原（均質化された組織）を試験血清とインキュベートし、完全に洗浄して未結合の抗体を除去します。 次に、既知の力価の抗グロブリン血清をこのホモジネートとインキュベートします。 その結果、抗グロブリンは組織に吸着された抗体によって消費されます。 したがって、抗グロブリン血清の力価は低下する。 インキュベーション前後の研究対象の抗体のレベルは、不完全な抗体で感作された赤血球からなるインジケーターシステムを使用して決定されるため、このオプションは血球凝集抑制反応の変更と見なすことができます。 テストの直接バージョンを設定する場合、テスト血清とのプレインキュベーションは実行されません。

この方法は、関節リウマチの自己抗体、全身性エリテマトーデスのDNAに対する抗体を決定するため、および白血球および血小板上の抗原に対する抗体の産生を証明するために使用されます。 この方法は、多くの非特定の要因にも依存します。そのため、適切な制御方法が特に重要です。 結果を解釈するとき、従来の技術が必ずしも抗原-抗体複合体のためにグロブリン結合を示すとは限らないことを忘れてはならない。

補体結合反応。 この 間接法抗体または抗原を検出します。 この反応は、補体が多数の抗原抗体反応に関与しているという事実に基づいています。 実験は2つの段階で設定されます。段階Iでは、試験血清と既知の抗原が補体とともにインキュベートされ、段階IIでは、溶血性血清と赤血球からなるインジケーターシステムが準備され、試薬の混合物に添加されます。 実験の最初の段階が抗原抗体反応で終了した場合、補体結合が起こりますが、インジケーター赤血球の溶血は見られないか、わずかに発現します。 研究中のシステムで抗原抗体複合体が形成されていない場合、補体はインジケーターシステムに完全に含まれ、溶血を引き起こします。 補体の供給源は通常、新鮮な血清です。 モルモット。 その補体は、すべての哺乳類種の抗体と反応します。 原則として、ラム赤血球に対するウサギ抗体で感作されたラム赤血球は、インジケーターシステムで使用されます。

免疫溶血反応と細胞毒性試験。 免疫溶血は、一方では補体活性の証拠として、他方では赤血球に対する抗体の細胞毒性効果の証拠として役立つ可能性があります。したがって、これらの反応は免疫血液学的診断にとって重要です。 受動的血球凝集は受動的溶血反応に変換できますが、試薬混合物は、抗体、適切な抗原がロードされた赤血球、および補体で構成されている必要があります。

細胞学的検査は、病因メカニズムの研究において有益です。 しかし、細胞培養法の複雑さを考えると、その使用の可能性はかなり限られています。 細胞毒性反応は、抗体（補体活性化）、キラー細胞、および感作されたTリンパ球によって媒介される可能性があります。

中和試験。 テストの原理は、抗体にさらされると、抗原の特定の生物学的特性が中和されることです。 抗毒素（破傷風、ジフテリア）および抗ウイルス抗体の検出に最も広く使用されています。

その他の方法。 別の章で以前に説明された方法に加えて（Schultz-Daleによるin vitroアナフィラキシー、好塩基球および肥満細胞からのヒスタミンの放出、 皮膚試験、免疫応答、受動的皮膚アナフィラキシーおよびプラウスニッツ・クストナー反応を評価するためのテストとしてのアレルゲンの「許容」用量）、IgEの産生を証明するための方法、免疫複合体の分析のための診断テスト、自己免疫疾患における自己抗体の検出。

Bリンパ球の数の決定フローサイトメトリーを使用したBリンパ球の測定は、細胞表面に固定された免疫グロブリン、CD19およびCD20の検出に基づいています。 年長の子供と大人では、Bリンパ球がすべての血液リンパ球の10〜20％を占め、年少の子供ではそれ以上です。

抗体価の測定体液性免疫の欠如が疑われる場合は、タンパク質および多糖抗原に対する抗体の力価が評価されます。 通常、それらはワクチン接種または感染後に決定されます。

タンパク質抗原に対する抗体ほとんどの場合、ジフテリアおよび破傷風トキソイドに対するIgGは、DPTまたはDTPのワクチン接種の前と2〜4週間後に検査されます。 ほぼすべての成人がDTPワクチン接種を受けているため、再ワクチン接種後の抗体のレベルは二次免疫応答の指標です。 ヘモフィルスインフルエンザB型ワクチンの投与後、PRP抗原に対する抗体を検出することも可能です。この抗原は多糖類ですが、結合型ワクチンではタンパク質抗原として機能します。 抗体は、不活化ポリオワクチンと組換えB型肝炎ワクチンで免疫した後に検査されることがあります。免疫不全が疑われる場合、生ウイルスワクチンは禁忌です。

多糖抗原に対する抗体多糖抗原に対する体液性免疫応答を評価するために、タンパク質担体を含まない肺炎球菌および髄膜炎菌ワクチンが使用されます。 抗体価は、ワクチン接種の前と3〜4週間後に決定されます。 一部の研究所では、インフルエンザ菌B型に対する非抱合型ワクチンがこの目的で使用されており、患者の年齢を考慮して結果が評価されています。 したがって、2歳未満の子供では、多糖抗原に対する免疫応答が弱く、一部の子供では5年まで免疫応答が維持されます。 この点で、幼児への多糖類ワクチンの使用は不適切であり、禁忌でさえあります。それは、高齢者の免疫寛容と効果のない再ワクチン接種につながる可能性があるからです。

一次および二次体液性免疫応答の評価抗原のクリアランスを決定するために、IgM（一次免疫応答）およびIgG（二次免疫応答）のレベル、バクテリオファージFichi 174、人間にとって安全な細菌ウイルスがタンパク質抗原として使用されます。 胃鞘ヘモシアニン、組換えB型肝炎ワクチン、単量体フラゲリン、ダニ媒介性脳炎ワクチンも、一次体液性免疫応答を評価するために使用されます。

天然抗体（イソヘマグルチニン、ストレプトリジンOに対する抗体、ヒツジ赤血球に対する抗体などの異好性抗体）は通常、ほとんどすべての人の血清に存在します。 これは、これらの抗体が向けられている抗原が広く行き渡っており、食品、吸入粒子、および気道の微生物叢に見られるという事実によるものです。

IgGサブクラスの定義。気道の再発性細菌感染症において、IgGの総レベルが正常またはわずかに低下している場合、またはIgAの孤立した欠乏が検出された場合、IgGサブクラス化が示されます。 この場合、IgG 2欠損症を検出することができ（IgG 2はIgGの約20％を構成します）、これを分離するか、IgAまたはIgG4欠損症と組み合わせることができます。 体液性免疫応答の機能的評価は、IgGサブクラスの定量的決定よりも有益な研究方法であることを覚えておく必要があります。 したがって、IgG 2のレベルが正常であると、肺炎連鎖球菌の多糖抗原に対する抗体のレベルが低下することがよくあります。 これに加えて、免疫不全の臨床症状がない場合、重鎖の合成の違反により、先天性IgG2欠損症が発生する可能性があります。

IgAの定義。正常な血清IgAを伴う分泌型IgAの孤立した欠乏はまれです。 原則として、分泌型IgAと血清IgAが同時に欠乏します。 孤立性IgA欠損症は、臨床的に沈黙しているか、軽度の上気道感染症を伴います。 これは、IgA欠乏症では、血清中のIgGと粘膜分泌物中のIgMのレベルが代償的に増加するという事実によるものです。 IgAレベルは、涙、唾液、その他の体液で測定されます。 IgAには、IgA1とIgA2の2つのサブクラスがあります。 IgA 1は気道の血液と分泌物で優勢であり、IgA2は消化管の分泌物で優勢です。 IgA1およびIgA2の正常レベル。

invitroでの免疫グロブリンの合成。このテストでは、刺激されたBリンパ球によるIgM、IgG、およびIgAの産生を測定します。 異なる刺激物で処理された健康なTリンパ球と病気のTリンパ球とBリンパ球を混合することにより、TヘルパーとBリンパ球の機能を評価することができます。 ほとんどの場合、抗体欠乏症は、Bリンパ球の形質細胞への分化障害が原因です。

リンパ節の生検原発性免疫不全症が疑われる場合、原則として、それらは生成されません。 診断が不明確で、患者のリンパ節が腫大している場合にのみ適応となり、血液芽細胞症の除外が必要になります。 生検は通常、抗原刺激の5〜7日後に行われます。 抗原はその領域に注入され、そこからリンパ節のグループに流れ込み、そのうちの1つが生検の対象となります。 リンパ節の体液性免疫の欠如により、形質細胞の数が減少し、一次濾胞の数が増加し、二次濾胞が存在せず、皮質物質の厚さが減少し、リンパ節組織の再構築が観察されます、そして時々マクロファージと樹状細胞の数が増加します。

腸生検一般的な可変低ガンマグロブリン血症および孤立性IgA欠損症を伴う産生。 生検 小腸慢性下痢および吸収不良症候群において、クリプトスポリジウム属菌によって引き起こされる粘膜の絨毛性萎縮および感染症を除外することが示されています。 ランブル鞭毛虫。

抗体クリアランス率標識免疫グロブリンを使用して研究。 この研究は、消化管を介した免疫グロブリンの喪失が疑われる場合に適応されます。